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第一部分：缺氧诱导脊髓神经细胞凋亡中ROCK-2的表达目的探讨ROCK-2基因在缺氧诱导神经细胞凋亡过程中不同时期的差异表达和作用。方法采用体外培养技术获得新生S-D大鼠原代脊髓灰质神经细胞,进行完全性缺氧,分别于缺氧后24h、48h、72h和96h获取神经元,采用qRT-PCR检测ROCK-2以及caspase-3和caspase-9的表达量；同时,采用流式细胞术检测缺氧神经细胞的凋亡率。结果新生鼠原代脊髓神经细胞经体外培养1月后数量趋于稳定。经免疫组化鉴定为脊髓神经元。在缺氧后24h、48h、72h和96h细胞凋亡的发生率分别为5.4%、15.4%、24.9%和36.6%。在相应时间点caspase-3的相对表达量分别为2.15、6.42、3.68和0.89; caspase-9分别为1.45、1.89、1.42和1.44：ROCK-2的相对表达量分别为1.02、2.35、7.87和4.41。结论Rho/ROCKs基因参与了缺氧性神经细胞凋亡的过程,ROCK-2表达较晚但持续较长。而且,ROCKs可能通过激活caspase途径发挥其凋亡诱导作用。第二部分：siRNA对缺氧诱导神经细胞凋亡的抑制作用目的探讨ROCK-2特异性siRNA对脊髓神经细胞凋亡的影响。方法S-D大鼠脊髓神经细胞体外分离培养。搜索GeneBank中大鼠ROCK2基因序列,shROCK2载体构建,筛选出抑制效率高的shROCK2质粒,转染脊髓神经元。提取细胞总RNA, Real-time qPCR检测ROCK2以及caspase-3和caspase-9基因相对表达量变化。提取细胞总蛋白,Western blot检测ROCK2以及caspase-3和caspase-9蛋白相对表达量变化。MTT检测平均OD490值并绘制细胞生长曲线。流式细胞技术检测脊髓神经元凋亡水平。结果在空白组、阴性组、缺氧组及shROCK2抑制组ROCK2基因转录水平的相对表达量分别为：1.00、0.94、1.39、0.62；在相应组caspase-3的相对表达量分别为1.00、1.02、1.63、0.90；在相应组caspase-9的相对表达量分别为1.00、0.98、1.85、0.78。在空白组、阴性组、缺氧组及shROCK2抑制组ROCK2蛋白相对表达量分别为：1.00±0.102、1.05±0.061、2.77±0.160、0.79±0.044；在相应组caspase-3蛋白相对表达量分别为1.00±0.105、0.86±0.075、1.55±0.239、0.79±±0.070;在相应组caspase-9蛋白相对表达量分别为1.00±0.090、0.96±0.090、2.60±0.250、0.67±±0.092。在空白组、阴性组、缺氧组及shROCK2抑制组48h细胞增殖率分别为：2.24±0.161、2.03±0.051、1.31±0.023、2.61±0.101；在相应组G2/M期细胞所占比例分别为：15.84±0.66%、12.14+0.44%、8.26+0.44%、20.25+0.66%；在相应组凋亡早期细胞所占比例分别为：1.95%、2.30%、29.81%、0.69%。结论上述结果表明：ROCK-2特异性siRNA显著抑制了ROCK-2、caspase-3、 caspase-9基因转录水平及蛋白的表达,抑制了脊髓神经元的凋亡,促进了细胞的增殖。ROCK-2与caspase-3、caspase-9基因转录水平及蛋白表达水平的变化呈平行关系,ROCK-2通过激活caspase基因的途径发挥其促进凋亡作用。