马铃薯是最重要的块茎类粮食作物。栽培马铃薯以四倍体为主,但是四倍体遗传和薯块繁殖增加了马铃薯改良的难度。因此越来越多的科学家呼吁在二倍体水平进行马铃薯的再驯化,将马铃薯驯化成种子繁殖作物。但是二倍体马铃薯存在着自交不亲和的现象,使得一些优秀基因不能交流,则是二倍体育种的一个重大难题。植物基因工程技术可以通过直接基因定点突变来打破自交障碍实现自交亲和,从而为实现二倍体育种提供原材料。本文对二倍体马铃薯CIP 703541的柱头进行转录组测序,对测序结果进行拼接,利用参考基因组DM的S-RNase序列对拼接结果进行比对,成功扩增2条全新的S-RNase序列。并设计构建附带有NPT II基因和GFP基因的CRISPR/cas9表达载体对农杆菌介导的二倍体马铃薯的遗传转化体系进行摸索,对S-RNase进行敲除。其中包括预培养时间、再生阶段植物激素浓度、愈伤再生的卡那霉素筛选浓度以及抗性芽生根培养的卡那霉素筛选浓度的探究。结果表明:（1）预培养时间以2天最适合侵染。（2）再生阶段的植物激素浓度为玉米素:2.0mg·L^-1+萘乙酸0.01 mg·L^-1时最适合再生出苗。（3）卡那霉素适合的筛选压为100mg·L^-1,生根抗筛浓度为50 mg·L^-1。（4）获得的转基因植株经PCR扩增目的基因突变位点进行Sanger测序,证实已经发生突变。从而建立了以CRISPR/cas9为基因敲除手段的二倍体马铃薯的遗传转化体系,并成功获得了S-RNase敲除的二倍体再生植株,其中编辑效率达到了13.5%（5）成功获得了能够自交亲和的二倍体马铃薯。