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目的肿瘤的发生发展是一个多基因参与、经多阶段、多步骤渐进演化的复杂过程。该过程涉及到众多原癌基因的激活和肿瘤抑制基因的突变和／或失活。最近研究发现,microRNA(miRNA)在肿瘤的发生发展中有着不可或缺的重要作用,常发挥致癌因子或抑癌因子的作用,可以解释肿瘤的发病机制和提供新的肿瘤治疗策略,现已成为肿瘤分子方向研究的热点。乳腺癌是一种异质性非常高的恶性肿瘤,不同miRNA在乳腺癌的发生发展中扮演不同角色,即使同一miRNA在乳腺癌不同阶段可能发生不同的表达变化。迄今为止,有关miRNA在乳腺癌癌前病变中表达水平改变的研究甚少。在我们的研究中,通过miRNA芯片和实时定量PCR技术系统研究miRNA在乳腺癌癌前病变(导管内癌,Ductal Carcinoma in situ, DCIS)中表达水平的改变。并且希望找到在乳腺癌早期发挥特定作用的miRNA,进而对这些新发现的miRNA进行功能学研究,探讨这些miRNA在乳腺癌发生发展中扮演的角色,以期为乳腺癌的早期发现提供有效的肿瘤标志物,并且为今后的乳腺癌的治疗研究方向提供线索。方法选取天津医科大学附属肿瘤医院2007-2012年间经乳腺外科手术所得的21对冻存乳腺组织,每一对包含来自同一患者的DCIS组织及相应乳腺癌旁正常组织(Adjacent normal tissues,NATs),从中选取1对冻存组织进行miRNA芯片分析,根据芯片检测结果筛选出两种组织中表达差异的miRNA,利用实时定量PCR技术在21对冻存组织中进行验证。然后从所有验证结果中选出在DCIS肿瘤组织中表达水平发生明显改变的miRNA-132进行体外功能学研究。利用MDA-MB-231、MCF-7和BT-549三种乳腺癌细胞系,通过CCK-8试剂、克隆形成实验和流式细胞术对miRNA-132在乳腺癌细胞分裂增殖过程中扮演的角色进行系统的功能学研究。结果1.通过miRNA芯片对样本进行检测,与相应NATs相比,检测出在852个miRNA在两种组织中存在表达水平差异,但以差异倍数FC(FoldChange)≥3做为表达差异筛选标准,仅有155个miRNA表达差异符合我们的筛选标准,并且通过这些差异表达的]niRNA我们可以明显区分两种组织。2.在miRNA芯片基础上,我们从中选取表达水平发生较大改变的miRNA,利用实时定量PCR方法在21对组织中分别进行验证,统计结果显示miRNA-125b、miRNA-145、miRNA-10b、miRNA-132、miRNA-409、 miRNA-154和miRNA-382表达水平发生的改变具有显著的统计学差异。3. miRNA-132进行体外实验功能学验证,在CCK-8实验中显示其在MDA-MB-231、MCF-7和BT-549细胞中具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用；细胞克隆形成实验显示其在MDA-MB-231和MCF-7细胞中具有抑制乳腺癌细胞克隆的形成的作用；在流式细胞术实验中显示其在BT-549细胞系中可以将细胞周期阻滞在S/G2的阶段。结论1.通过miRNA芯片的测量和实时定量PCR的验证工作,证实在与乳腺癌浸润转移有关的miRNA中,miRNA-125b、miRNA-145和miRNA-10b在乳腺癌早期阶段(DCIS)表达水平就已经发生明显的改变,且三者均发生低水平表达改变。2.通过miRNA芯片的测量和实时定量PCR的验证工作,证实既往在乳腺癌领域中研究较少的miRNA-132、miRNA-409、miRNA-154和miRNA-382在DCIS组织中发生明显的改变,变化方向与miRNA芯片结果相同。3. miRNA-132在体外具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用,扮演抑癌因子的作用。在抑制乳腺癌的发生发展中扮演重要的角色,是值得我们深入研究的一个重要miRNA分子。