在生物防治技术高速发展的今天，枯草芽孢杆菌由于能分泌多种对病原细菌、真菌均有明显拮抗作用的物质，被广泛的应用于病害的生物防治中。但是关于生防菌株对病原菌的抑菌机理、生防菌与病原菌以及寄主植物三者之间的关系等还有待探索。可以通过对生防菌株抑菌相关基因的克隆鉴定，并通过原核表达获得这些基因的融合蛋白，分析蛋白的结构和功能，从而探索生防菌株的抑菌机理。　　 生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03是本研究室从柑橘植株叶面分离到的一株具有广谱抑菌作用的细菌菌株。前期的研究表明枯草芽孢杆菌CQBS03对柑橘溃疡病菌有明显的抑制作用，并以绿色荧光蛋白(Greenfluorescentprotein，GFP)标记生防菌株，研究其在柑橘叶面的定殖规律。本研究从枯草芽孢杆菌CQBS03中克隆TasA基因并获得原核表达产物，表达产物对柑橘溃疡病菌有明显的抑制效果，并构建了含TasA基因的高表达工程菌株，该工程菌株对柑橘溃疡病菌表现出较原始菌株更强的抑制作用，为柑橘溃疡病转基因抗病柑橘植株提供有用的靶标基因奠定基础。　　 主要研究成果:　　 ①采用PCR方法从生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03中克隆到TasA基因全序列，该基因包含一个786bp的完整开放阅读框（GenBank登录号为JQ309841），编码261个氨基酸残基。该序列与来源于解淀粉芽孢杆菌的1个已知同源TasA基因序列(FJ713580)的相似性达99.75％。　　 ②构建了pEASY-E1/TasA原核表达载体，并在大肠杆菌BL21中成功表达，表达产物经SDS-PAGE检测到约31kD的融合蛋白，纯化后的融合蛋白对柑橘溃疡病菌有明显抑制作用，72h后抑菌圈直径达11.5mm。　　 ③将p43启动子和TasA基因进行融合，并与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHY300PLK连接，构建了携带TasA基因的重组质粒pHY43T。　　 ④重组质粒以电脉冲转化生防菌CQBS03，对获得的工程菌株CQBS03-pHY43T进行了生长动力学分析、质粒稳定性测试以及柑橘溃疡病菌抑菌实验。结果显示，外源质粒对宿主菌的生长未带来明显不利影响;质粒稳定性实验表明重组质粒pHY43T在连续稀释培养10代后稳定性为87％;抑菌试验表明工程菌株CQBS03-pHY43T防治效果与出发菌株CQBS03有明显差异(P＜0.01)。　　 结论:成功从生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03中克隆到TasA基因全序列，通过原核表达获得了TasA基因的融合蛋白，纯化后的融合蛋白对柑橘溃疡病菌有明显抑制作用。将TasA基因作为靶标基因构建高表达抑菌蛋白的工程菌株CQBS03-pHY43T，为构建高效生防菌株提供了基础菌株和构建方法。工程菌株CQBS03-pHY43T对柑橘溃疡病菌表现出较原始菌株更强的抑制作用，质粒稳定性好，有望用于柑橘溃疡病菌的田间防治。