论文部分内容阅读
目的：通过动物实验，观察消癓软肝方对肝硬化大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)含量和肝组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化以及肝组织病理形态学改变的影响，探讨本方治疗肝硬化的作用机制。
方法：选取健康Wistar大鼠60只，雄性，正常喂养1周后，平均分为5组，每组12只。即：正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、阳性药对照组(简称对照组)、消癓软肝方高剂量组(简称高剂量组)和消癓软肝方低剂量组(简称低剂量组)。除正常组外，其余各组动物首次皮下注射40％CCL4花生油溶液0.5ml/100g体重，以后每周2次皮下注射0.3ml/100g体重，并以30％乙醇作为饮料，以高脂饲料喂养。正常组则以正常饲料和纯净水喂养。实验9周末确定肝硬化形成后，高、低剂量组分别灌服消瘤软肝方药液，用药剂量分别为2.6g/kg、1.3g/kg，阳性药对照组灌服复方鳖甲软肝方混悬液，用药剂量为1.2g/kg，正常组和模型组灌服等量蒸馏水，均为每日一次。治疗4周后，于最后一次给药禁食12h后麻醉状态下，股动脉取血，将血样低温离心，分离血清，测定血清ALT、AST、TP、Alb的含量；同时迅速剖取动物肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5cm处取0.5cm×0.5cm大小肝组织，4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，运用HE染色光镜下观察肝组织病理形态学变化，并用免疫组织化学方法观察MMP-1及TIMP-1的表达变化。
结果：
1、消癓软肝方对肝硬化大鼠血清ALT、AST、Alb、TP的影响模型组大鼠血清ALT(110.36±8.81)、AST(122.15±12.33)含量较正常组(22.19±2.12，60.34±7.86)明显升高(P<0.01)，Alb(27.19±3.18)、TP(59.08±5.92)含量较正常组(36.84±3.66，67.86±7.11)明显降低(P<0.05)。给药治疗后，各治疗组血清ALT、AST含量均低于模型组(P<0.01)，TP、Alb含量均高于模型组(P<0.01)。其中高剂量组和对照组ALT(13.14±1.55)(12.81±1.54)以及AST(52.98±4.68)、(47.31±5.38)的含量均低于低剂量组(24.55±3.81，61.63±7.52)(P<0.05或P<0.01)；而高、低剂量组和对照组ALT与AST的含量以及高剂量组、低剂量组与对照组之间Alb(33.83±4.21，31.96±3.43，33.62±2.65)、TP(67.04±7.72，67.79±5.18，68.81±6.77)的含量，组间比较经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。
2、消癓软肝方对肝硬化大鼠肝组织病理形态学的影响
正常组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，肝细胞排列规则成索状，在中央静脉周围呈放射状分布。肝血窦结构清晰，无异常改变。肝细胞呈多边形，胞浆均匀，细胞核形态正常。模型组大鼠肝小叶正常结构破坏，肝间质广泛纤维组织增生，将正常肝小叶分割成大小不等的肝细胞团(即假小叶形成)，间质内弥漫性淋巴细胞浸润。同时肝细胞变性和增生反应明显。肝细胞变性表现为肝细胞胞奖内形成空泡(脂肪变性)肝细胞肿大，胞浆呈气球样。增生反应表现为肝细胞核大，着色深或双核，胞浆着色亦深，偏嗜碱性。还可见肝细胞成片坏死，胞浆红染，核消失。高剂量组肝小叶结构因纤维组织分割而紊乱，但纤维组织间隔细窄，炎细胞较少，原肝小叶没有被完全分割，中央静脉、汇管区仍有残存，肝细胞索排列、肝细胞形态与正常者相似。低剂量组和对照组纤维间隔变宽，炎细胞浸润明显，有些小叶被完全分割。肝细胞形态接近正常，变性和增生反应不明显。
3、消癓软肝方对肝硬化大鼠肝组织中MMP-1及TIMP-1表达的影响
模型组大鼠肝组织MMP-1(0.125±0.035)和TIMP-1(0.283±0.029)表达较正常组(0.098±0.014，0.089±0.011)明显增强(P<0.05或P<0.01)。经用药干预后，各用药组大鼠肝组织MMP-1的表达较模型组增强(P<0.01)，TIMP-1的表达均较模型组减弱(P<0.01)。其中，高剂量组MMP-1(0.282±0.019)的表达强于对照组(0.222±0.024)(P<0.05)，而低剂量组(0.236±0.027)与对照组之间未见明显差异(P>0.05)；高剂量组TIMP-1(0.159±0.023)的表达低于低剂量组(0.195±0.031)、对照组(0.198±0.027)(P<0.05)，而低剂量组与对照组之间未见明显差异(P>0.05)。
结论：
1、消癓软肝方具有显著的减轻肝硬化大鼠的病理损害，保护肝细胞，改善肝功能，促进蛋白合成的作用，为治疗肝硬化的有效药物。
2、肝硬化时肝组织中MMP-1和TIMP-1表达明显增强，说明MMP-1和TIMP-1表达的异常改变与肝硬化的发生与发展具有密切关系。消癓软肝方可通过促进肝组织中MMP-1的表达、抑制肝组织TIMP-1的表达，以达到抗肝硬化的作用，这可能是其治疗肝硬化的分子机制之一。