研究背景：足细胞是局灶节段肾小球硬化（FSGS）肾组织病变形成的主要受损靶细胞。研究表明，足细胞受到损伤后，发生凋亡、自噬、坏死，导致其数目减少。肾小球内足细胞数目减少直接导致了蛋白尿的发生和肾小球硬化形成，最终影响肾功能。近年来，随着肾小球壁层上皮progenitor细胞的发现，在肾小球足细胞损伤修复研究领域，足细胞再生修复机制引起人们重视。足细胞损伤后，是否发生壁层上皮细胞向足细胞转分化，增生修复脱落的足细胞，防止肾小球硬化发生，是肾小球再生修复研究的重点。糖皮质激素类药物被广泛用于治疗由足细胞病变导致的肾病综合征，例如FSGS。然而，该领域尚缺乏糖皮质激素类药物是否可直接作用于肾小球固有细胞，促进足细胞损伤再生修复的机制研究。因此，本课题的总研究目的将探讨糖皮质激素对足细胞的直接保护作用，以及是否具有促进其再生修复作用。研究将证实，该作用是否与壁层上皮progenitor细胞向足细胞转分化有关。本研究由两部分组成：第一部分：体内动物试验观察糖皮质激素治疗FSGS模型小鼠对其足细胞保护和损伤后修复的作用。目的：通过体内动物试验证实，糖皮质激素是否具有足细胞保护作用，以及糖皮质激素是否能促进肾小球足细胞再生，而该过程与增加肾小球壁层上皮progenitor细胞有关。方法：1．通过具有足细胞毒性的抗肾小球足细胞抗体诱导B6129SV/j小鼠建立临床表现为蛋白尿，肾脏病理表现为局灶节段性肾小球硬化的小鼠动物模型。2．在模型建立后第3天，经皮下注射糖皮质激素，分别与治疗2周、4周后行活检，获取肾组织。3．重点通过免疫组织化学染色方法，观察肾小球病理形态学变化，足细胞数目增减情况，以及肾脏固有细胞凋亡和肾小球壁层上皮细胞分化情况。结果：1．连续两天抗体注射诱导后，肾小球足细胞与模型第3天已出现明显下降，糖皮质激素治疗2周和4周后，足细胞数目得到部分恢复，肾小球硬化程度减轻，而对照组无此现象。2．糖皮质激素治疗肾小球足细胞caspase-3表达明显下降，首次于体内研究发现糖皮质激素具有抗足细胞凋亡作用。3．糖皮质激素治疗组肾脏足细胞的progenitor细胞，定义为同时表达足细胞和壁层上皮细胞特有蛋白，其数目明显多于对照组；并同时观察到糖皮质激素治疗组壁层上皮细胞出现ERK信号通路磷酸化活跃。4．糖皮质激素治疗组模型动物，肾小球内壁层上皮细胞表达CD44明显降低，而此现象与肾小球硬化程度成正相关，提示糖皮质激素可能通过抑制CD44表达，而抑制壁层上皮细胞活化，从而减轻上皮细胞向间充质细胞转分化，参与硬化病变的形成。结论：以足细胞损伤为特征的FSGS模型小鼠动物试验证实，糖皮质激素能够缓解足细胞损伤，促进其再生修复。此过程可能与糖皮质激素抗足细胞凋亡，通过促进肾小球壁层上皮细胞ERK信号通路活化，向足细胞转分化，参与其再生修复过程有关。第二部分：体外细胞培养试验观察糖皮质激素促进肾小球壁层上皮细胞表达足细胞蛋白检测。目的：通过体外细胞培养试验，观察糖皮质激素是否可诱导肾小球壁层上皮细胞表达足细胞特有蛋白。方法：1．通过细胞培养试验，建立小鼠肾脏壁层上皮细胞系。2．37C培养箱中，2%FBS细胞培养液培育细胞14天后，加入不同浓度的（1-20μM）地塞米松，继续培育24-72小时。3．收获细胞后，行免疫细胞化学染色，观察成熟壁层上皮细胞蛋白PAX2和成熟足细胞蛋白synaptopodin表达情况。结果：1．不同浓度和不同培育时间的含地塞米松细胞培养液均能促使壁层上皮细胞表达足细胞特有蛋白synaptopodin，而对照组无此现象。2．低浓度地塞米松（5μM）促使synaptopodin表达作用明显，且该现象可发生于24小时内。结论：体外细胞培养试验发现糖皮质激素可诱导壁层上皮细胞表达足细胞特有蛋白，但是其机制尚不清楚。