研究背景肺癌是全世界目前死亡率最高的恶性肿瘤，是我国恶性肿瘤病人死亡的首要原因，占全部恶性肿瘤死亡的22.7%，且发病率和死亡率仍在迅速上升，多数患者在确诊时已为中晚期，其中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者超过50%，这些病人失去手术机会，因此，大多数肺癌患者需要接受化疗，一线化疗方案为铂类为基础的两药联合方案，晚期NSCLC的治疗已有重大进展，但仍然存在预后差、生存期短等问题。以表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)为基础的分子靶向药物治疗在肺癌的治疗中发挥着重要作用，成为国内外研究的热点。EGFR高表达是应用EGFR-TKI的基础， TKI的疗效与EGFR突变密切相关，突变中85%-90%是外显子19的缺失突变和外显子21的点突变。EGFR基因突变的非小细胞肺癌患者对TKI治疗有效率可以达到75%，但仍有部分发生突变的患者在应用EGFR-TKI6-12个月后发生耐药，其机理尚不完全清楚。随着表观遗传学研究的进一步深入，人们发现DNA甲基化与肿瘤的发生发展和治疗有密切关系，会导致抑癌基因和癌基因沉默，甲基化不改变DNA序列且具有可逆性，所以也成为肿瘤治疗的新靶点。EGFR基因5′调控区启动子有一个富含GC的CpG岛,在部分实体瘤病人中EGFR基因CpG岛表现为高甲基化状态，这部分病人EGFR低表达甚至不表达。研究目的本实验通过检测肺癌组织中EGFR启动子的甲基化状态，探讨其与肺癌临床特征、EGFR突变的相关性，为肺癌的靶向药物治疗提供进一步理论依据。研究方法应用DNA提取试剂盒提取肺癌患者手术样本的基因组DNA，经过DNA亚硫酸氢盐转变后回收产物，未发生甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，发生了甲基化的胞嘧啶保持不变。回收的DNA进行PCR扩增，扩增产物进行测序分析，由于测序所得结果覆盖的目的片段较短，不能从整体上反映启动子整体的甲基化状态，应用荧光偏振检测技术对EGFR启动子甲基状态进行进一步检测，将两部分检测结果相结合，分析EGFR甲基化状态与肺癌患者临床特征和EGFR突变的相关性。研究结果：第一部分实验收集的76例肺癌组织中有23例检测到EGFR基因启动子甲基化，甲基化率为30.3%，甲基化状态与肺癌患者的性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、浸润程度和TNM分期无明显相关，与病理类型相关，鳞癌患者的甲基化率明显高于腺癌患者，吸烟者发生EGFR甲基化的危险度比不吸烟者高1.88倍。第二部分实验结果显示，EGFR基因启动子甲基化与突变状态也有密切关系，发生19、21外显子突变的患者均未检测到启动子甲基化。结论：EGFR基因启动子甲基化在非小细胞肺癌患者中存在较高的检出率，可能与肺癌的发生发展和治疗有关。EGFR甲基化与患者的病理类型有关，鳞癌明显高于腺癌，EGFR甲基化与19、21外显子突变状态密切相关。