【摘 要】
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曲细精管内的支持细胞在雄性哺乳动物的精子发生和睾丸发育中起着重要作用。胎儿期支持细胞的增殖是睾丸索形成的基础,而睾丸索又影响着成年期睾丸的正常发育和功能。青春期前支持细胞群的发育程度将决定成年后的生精能力,支持细胞发育或增殖过程中的损害可能导致精子数量和精液质量下降。Micro RNA（miRNA）在精子发生和睾丸发育等过程中发挥重要的调控作用,然而在牛睾丸支持细胞中大多数miRNA的作用机制尚不
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（NO.81770514、81270439）； 杨凌示范区科技计划项目（2018NY-33）；
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曲细精管内的支持细胞在雄性哺乳动物的精子发生和睾丸发育中起着重要作用。胎儿期支持细胞的增殖是睾丸索形成的基础,而睾丸索又影响着成年期睾丸的正常发育和功能。青春期前支持细胞群的发育程度将决定成年后的生精能力,支持细胞发育或增殖过程中的损害可能导致精子数量和精液质量下降。Micro RNA（miRNA）在精子发生和睾丸发育等过程中发挥重要的调控作用,然而在牛睾丸支持细胞中大多数miRNA的作用机制尚不明确。前期安格斯牛睾丸组织转录组测序结果表明,bta-miR-375在牛性成熟前后的睾丸中的表达量具有显著差异,因此本研究探讨了bta-miR-375调控牛支持细胞增殖、分泌和凋亡的作用机制。利用RT-q PCR、Western blot、流式细胞术、CCK-8以及Ed U等试验方法检测牛支持细胞增殖和凋亡的变化。研究结果如下:（1）RT-qPCR结果表明bta-miR-375在牛性成熟期睾丸中高表达（P＜0.01）。miR-375过表达可以抑制牛睾丸支持细胞增殖和分泌并促进其凋亡;抑制miR-375的表达可以促进支持细胞增殖和分泌并抑制其凋亡。（2）结合前期RNA-seq分析数据和Target Scan预测结果,本研究筛选到miR-375的3个潜在靶基因（STARD6、CSTF2、NFE2L2）。双荧光素酶报告实验和RT-q PCR试验结果表明,STARD6为bta-miR-375的靶基因。（3）干扰STARD6的表达可以抑制牛支持细胞增殖和分泌因子的表达,促进支持细胞凋亡。与此同时,干扰STARD6的表达可以减轻miR-375 inhibitor对牛支持细胞增殖、分泌促进作用;减轻miR-375 inhibitor对支持细胞凋亡的抑制作用。以上试验结果表明,bta-miR-375可通过靶向STARD6基因抑制牛支持细胞的增殖和分泌因子的表达,并促进支持细胞凋亡。
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