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细胞生物学研究的一个重要方向是动态地控制细胞在基底上的黏附。最近,随着表面化学的研究深入,尤其是对烷基硫醇在金基底上形成自组装单层膜(self-assembledmonolayers,SAMs)这一体系的研究,使得人们能在分子水平的表面上控制细胞黏附。精氨酸一甘氨酸.天冬氨酸(arginine-glycine-aspartate,RGD)序列首先是从细胞外基质蛋白中分离出来的,能够识别并非共价结合细胞膜表面的整合素受体,从而促进细胞黏附。以前的一些工作已经证实,将含有RGD的肽链连接到SAMs表面之后,能够生物特异性地黏附动物细胞。已有的手段比如光照、电压、加热、微电极、微流控以及表面纳米形貌的梯度变化,都不能真正实现可逆地控制细胞黏附,原因是这些方法所用的化学有限;这些方法也不能得到完全抗拒细胞黏附的表面,原因是这些方法产生的表面缺陷等不完整。用两种不同波长的光(紫外光和可见光)照射偶氮苯,偶氮苯会发生可逆的光致异构变化,因此,偶氮苯的光致异构性质可以用来可逆地控制细胞在表面黏附。运用含有偶氮苯的混合SAMs,偶氮苯的末端连接GRGDS肽,混合SAMs中是以末端为六聚乙二醇的硫醇为背景,该SAMs修饰而成的表面能够黏附或者抗拒细胞黏附,其表面黏附性质取决于SAMs中偶氮苯的构象。该方法提供了一种在分子水平的表面上我们所了解到的唯一能可逆控制细胞黏附的方法,该方法需要用到的光源来自于标准荧光显微镜所配置的汞灯。
为了实现在金基底表面可逆的控制细胞黏附,我们合成了如下三个化合物:
由于化合物1的溶解性很差,几乎在所有溶剂里都不溶,所以不能直接用化合物1制备SAMs;化合物2能高效地抗拒细胞的黏附;化合物3的偶氮苯末端是活化酯,能够连接GRGDS肽,从而控制细胞黏附。
将化合物2和化合物3以一定的比例均匀混合在金基底表面形成SAMs,然后将GRGDS肽连接到偶氮苯(反式)的末端(通过GRGDS肽的甘氨酸上的伯胺基与偶氮苯末端的活化酯反应),从而得到细胞黏附的表面。用紫外光照射该细胞黏附表面5-10小时,随着偶氮苯的构象由反式变为顺式,偶氮苯末端的GRGDS肽淹没在化合物2的六聚乙二醇中,得到抗拒细胞黏附的惰性表面。再用可见光照射该惰性表面1个小时,随着偶氮苯的构象由顺式变为反式,原先埋没在六聚乙二醇中的GRGDS肽伸展至单层膜的末端,又得到了细胞黏附的表面。因此,该表面能完全可逆地控制细胞在金表面黏附。