水蛭素是迄今为止发现的特异性最好的凝血酶抑制剂,本文对天然水蛭素的提取纯化以及聚乙二醇修饰展开研究,并对修饰产物的性质进行初步探索。目前人们对于天然水蛭素的提取进行了大量的研究,本文在水蛭素纯化过程中,对水蛭预处理、粗提和纯化步骤进行了研究。在水蛭预处理中比较了微波、缓冲液提取、烘干、冻干四种方法,证实微波法可导致水蛭素失活,后三种方法对于水蛭素活力保留没有差别。在粗提过程中,采用pH选择法可以很好地使水蛭素活力保留,粗提液比活力为3.19 ATU/mg。使用离子交换以及凝胶过滤层析法纯化粗提液,经离子交换层析后得到产物比活为9.1×10~3 ATU/mg。经SDS-PAGE电泳分析证实得到水蛭素纯度较高。作为最强的凝血酶抑制剂,水蛭素存在体内半衰期短等的药用缺点。聚乙二醇修饰是目前有效地延长其半衰期的方法。本文用琥珀酰亚胺活化的mPEG 5kDa和mPEG 20kDa对水蛭素进行化学修饰。比较了两种方式即液相与离子交换树脂辅助的固相修饰的结果。并优化PEG 20 kDa固相修饰的反应条件为pH 8 PBS,HV2/SC-PEG摩尔比1:9,反应60min。PEG 5 kDa与PEG 20 kDa修饰相比较,产物产率较高,而单一性较低。离子交换层析结果表明,固相修饰分离度优于液相反应,且产品单一性较高,但是转化率低于液相反应。体外抗凝活性分析表明,固相反应中,无论是PEG 5 kDa,还是PEG 20 kDa修饰,活力保留率都远远高于液相反应。另外,PEG 5 kDa修饰产物活力保留率均低于相同反应方式下PEG 20 kDa的修饰产物。分子动力学模拟方法预测固相修饰反应中修饰产物的修饰位点为K35。通过凝胶层析分析液相修饰产物,多修饰产物并不稳定,可以降解为修饰度更低的产物,单修饰产物较为稳定。修饰后水蛭素所增加的表观分子量为连接PEG分子量的4.4～6.2倍之间。