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本研究利用稳定转染的方法构建了稳定表达人有机阴离子转运体OAT1和/或药物代谢酶CYP1A2的MDCK细胞模型,并且从mRNA水平、蛋白水平和活性水平进行了验证,利用该细胞模型进行了潜在的OAT1底物/抑制剂的筛选,并考察了马兜铃酸对不同细胞模型的毒性差异。目的：构建稳定表达人有机阴离子转运体OAT1和/或药物代谢酶CYP1A2的MDCK细胞模型,应用该系列细胞模型进行OAT1底物/抑制剂的筛选,考察OAT1和CYP1A2在马兜铃酸细胞毒性中所发挥的作用。方法：构建重组质粒pcDNA3.1(+)-hOAT1,将其转染MDCK细胞,经G418筛选后采用有限稀释法挑选单克隆细胞,通过OAT1经典底物6-羧基荧光素、对氨基马尿酸的摄取实验验证单克隆细胞中hOAT1转运活性,通过荧光定量PCR和Western-blot验证mRNA和蛋白表达情况,从中筛选出稳定高表达hOAT1的MDCK-OAT1单克隆细胞。再将得到的hOAT1的单克隆细胞和MDCK细胞采用pcDNA3.1(+)/Hygro-CYP1A2质粒进行转染,通过考察功能活性、mRNA表达水平筛选出高活性的MDCK-CYP1A2和MDCK-OAT1/CYP1A2细胞株。利用构建的MDCK-OAT1细胞模型考察若干中药化学成分对OAT1功能的抑制效果,评估马兜铃酸在MDCK-OAT1、MDCK-CYP1A2和MDCK-OAT1/CYP1A2细胞模型上的毒性差异。结果：采用含OAT1基因的质粒转染MDCK细胞后获得两株高表达OAT1的细胞株,通过RT-PCR. Western-blot验证了OAT1在mRNA和蛋白水平显著高表达。OAT1经典底物对氨基马尿酸、6-羧基荧光素在单克隆细胞内的积聚显著高于空白细胞。将上述细胞进一步采用含CYP1A2基因的质粒转染后,在mRNA水平可检测到CYP1A2基因的高表达。转染后的单克隆细胞可显著代谢CYP1A2的荧光底物。应用MDCK-OAT1细胞模型从若干中药活性成分中筛选出阿魏酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸A、甘草次酸、隐丹参酮、马兜铃酸等6种成分可显著抑制OAT1对6-羧基荧光素的摄取。马兜铃酸在MDCK、MDCK-OAT1、MDCK-OAT1/CYP1A2细胞模型中表现出不同程度的细胞毒性,OAT1和CYP1A2均可增加马兜铃酸的细胞毒性。结论：本研究成功构建了表达OAT1和/或CYP1A2的细胞模型。该细胞模型可用于OAT1潜在底物和抑制剂的筛选,也可用于OAT1和CYP1A2相关的药物毒理研究。