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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是一种杆状DNA病毒,具有囊膜和被膜,DNA为双链环状。WSSV是目前对虾的最主要的病害,对对虾养殖业造成了巨大危害。所以对WSSV的性质和感染机制等研究对于对虾养殖业意义重大。本研究的主要内容如下:①测定WSSV粒子的质量和其基本组成;②探讨微生物在感染了WSSV的螯虾死亡过程中所起的作用;③研究了WSSV囊膜表面的蛋白的种类;④对WSSV的一个蛋白激酶wsv083进行了初步研究。结果如下:1、通过先计算出WSSV基因组的质量,再测定WSSV的基因组DNA占整个WSSV粒子质量的比例的思路,计算出了一个完整WSSV粒子的质量。进一步测定得到WSSV悬液的每个OD600相当于3.34×108/l的病毒浓度。另外,WSSV各组分在总重量中的比例经测定如下:基因组DNA占10.17%,核衣壳中的蛋白占43.07%,囊膜中的脂类含量约为22%,囊膜中的蛋白质含量约为24.76%;另外还测定了四种主要膜蛋白的相对比例。2、为了研究微生物在感染了WSSV的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的死亡过程中的作用,对染毒螯虾注射抗生素,发现其死亡率与对照组相比有明显下降。平板计数结果显示染毒螯虾的血淋巴中微生物数量有明显增加。分析表明主要是嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、弗劳地柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)和琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)等条件致病菌。而抗生素对WSSV的增殖没有显著影响。研究结果表明螯虾在感染了WSSV后血细胞的消失导致体内病原微生物的数量大幅增加,从而加速了螯虾的死亡速度。3、利用生物素标记转移技术对牛血清白蛋白(BSA)和凡纳滨对虾的鳃细胞膜蛋白进行标记,研究其与对虾白斑综合症病毒(WSSV)之间的相互作用。发现分子量在50-56KD之间的两种蛋白质位于WSSV的表面,并且与鳃细胞膜蛋白具有特异性的相互作用。根据分子量推测可能是病毒的两种膜蛋白,VP52A和VP56。4、把wsv083在大肠杆菌中进行表达和纯化,与纯化的VP28和VP19置于激酶缓冲液中看能否催化磷酸化。研究结果表明wsv083并不具备这个功能。另外还发现wsv083存在苏氨酸和酪氨酸的磷酸化,但没有丝氨酸的磷酸化。而wsv083的突变体则没有磷酸化。结果表明wsv083可以催化自身磷酸化。但其具体功能还需进一步研究。