【摘 要】
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便秘是世界范围内常见的胃肠道消化疾病,严重影响人们的生活质量。膳食低聚糖可优化肠道菌群结构,已成为缓解便秘的重要手段。作为富含低聚糖的发酵酒,黄酒能否缓解便秘尚未可知。本研究首先开展动物实验探究黄酒对便秘的缓解作用,随后对黄酒中低聚糖进行提取,并利用小鼠便秘模型进一步探究其改善便秘的作用机制。首先通过灌胃洛哌丁胺建立小鼠便秘模型,探究了黄酒对小鼠便秘的缓解作用。黄酒干预显著增加了便秘小鼠的排便量、
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便秘是世界范围内常见的胃肠道消化疾病,严重影响人们的生活质量。膳食低聚糖可优化肠道菌群结构,已成为缓解便秘的重要手段。作为富含低聚糖的发酵酒,黄酒能否缓解便秘尚未可知。本研究首先开展动物实验探究黄酒对便秘的缓解作用,随后对黄酒中低聚糖进行提取,并利用小鼠便秘模型进一步探究其改善便秘的作用机制。首先通过灌胃洛哌丁胺建立小鼠便秘模型,探究了黄酒对小鼠便秘的缓解作用。黄酒干预显著增加了便秘小鼠的排便量、粪便含水量与小肠推进率,并显著降低了首粒黑便时间,有效增强胃肠动力（P＜0.05）。此外,黄酒干预显著增加了便秘小鼠血清中胃动素（MTL）、胃泌素（Gas）、P物质（SP）、5-羟色胺（5-HT）与肠道短链脂肪酸（SCFAs）的含量,并显著降低血清生长抑素（SS）的水平（P＜0.05）。16S r DNA分析表明黄酒干预重塑了便秘小鼠肠道菌群,显著增加了Lactobacillus等益生菌的丰度（P＜0.05）。黄酒中功能性组分被肠道菌群酵解后,可通过上调SCFAs的含量促进肠道5-HT的分泌,进而促进神经元分泌兴奋性胃肠调节肽,最终促进肠道蠕动。黄酒缓解小鼠便秘的效果优于同剂量的乙醇,这归因于黄酒中包括低聚糖在内的丰富的生物活性物质。对黄酒中缓解便秘的关键组分进行解析。分离纯化黄酒中低聚糖,并经体外菌群增殖实验与小鼠便秘实验分析黄酒低聚糖在黄酒缓解便秘的贡献。经75%浓度乙醇提取、Sevage法与膜分离技术可从半干型黄酒中分离出粗低聚糖。粗低聚糖依次经DEAE Sepharose Fast Flow及Sephadex G15纯化后得到纯度为84.21±0.16%的黄酒低聚糖组分HJO-a。结构分析表明,HJO-a的分子量为1002 Da,由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖与甘露糖等单糖组合而成,组成中存在少量蛋白质,其聚合度分布于2-17。通过体外菌群增殖实验发现,与阴性对照相比,黄酒低聚糖显著上调了菌群培养液中SCFAs的含量以及双歧杆菌、乳杆菌与拟杆菌的含量,并显著降低了肠杆菌的含量（P＜0.05）。动物实验表明黄酒低聚糖显著增加了便秘小鼠排便量、粪便含水量与小肠推进率（P＜0.05）,并显著降低首粒黑便时间（P＜0.05）。结果分析表明黄酒低聚糖在黄酒缓解便秘过程的贡献度为44.00%-76.76%。对黄酒低聚糖缓解便秘的作用机制进行解析。从便秘小鼠的机械屏障、免疫屏障、化学屏障与生物屏障对黄酒低聚糖缓解便秘的途径进行分析。对于机械屏障,黄酒低聚糖显著增加小鼠结肠occludin与ZO-1的表达（P＜0.05）;对于免疫屏障,黄酒低聚糖显著降低了肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-1β（IL-1β）的表达（P＜0.05）;对于化学屏障,黄酒低聚糖显著增加肠道SCFAs、MTL、Gas、SP、5-HT受体4基因、5-HT转运蛋白基因与5-HT的表达（P＜0.05）;对于生物屏障,黄酒低聚糖优化肠道菌群结构,显著增加肠道益生菌Lactobacillus、Alistipes、Roseburia与Odoribacter的丰度（P＜0.05）。对黄酒低聚糖缓解便秘的通路进行分析,黄酒低聚糖可有效恢复便秘小鼠肠道屏障,通过增加肠道SCFAs生成菌的丰度上调SCFAs含量,直接刺激胃肠蠕动或间接刺激肠嗜铬细胞分泌5-HT。5-HT可与肠道下神经元5-HT4R受体结合,直接促进胃肠蠕动或间接促进下神经元兴奋性胃肠调节肽MTL、SP与Gas的分泌,并减少抑制性胃肠调节肽SS的分泌,最终增强胃肠动力,达到缓解便秘的效果。
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