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目的:通过观察英德红茶和溪黄草复合饮料对急性酒精性肝损伤动物模型的影响,探讨英德红茶和溪黄草复合饮料的保肝解酒作用及其可能的作用机制,以期为该复合饮料的进一步开发研究和市场应用提供科学依据。
方法:取60只SPF级健康雌性昆明种小鼠,随机分为(1)第1组为空白对照组(空白组),(2)第2组为急性酒精性肝损伤组(模型组),(3)第3组为保肝药物组(水飞蓟宾组),(4)第4组为溪黄草组(4g生药/kg),(5)第5组为英德红茶组(20g生药/kg),(6)第6组为英德红茶和溪黄草复合饮组(4g溪黄草生药/kg+20g英德红茶生药/kg)。3~6组小鼠按0.1ml/10g体重灌胃给药,1~2组给等体积蒸馏水,1次/d,共10d,每次给药后1h,除空白组外的其他各组小鼠按0.1ml/10g灌胃给予52°白酒造模,1次/d,共10d。实验结束末,小鼠眼球取血并及时摘除肝脏称取全肝湿重。肉眼观察各组小鼠的肝脏形态变化,光镜下观察肝组织病理形态变化并评分;测定血清ALT、AST、m-AST、GDH值;测定肝脏酒精相关代谢酶ADH、CAT,抗氧化酶SOD、GSH-Px,非酶GSH,脂质过氧化终产物MDA值;蛋白质印迹法(WesternBlot,WB)检测肝脏组织CYP2E1和Nrf2蛋白的表达。
结果:1.与空白组比较,模型组小鼠肝脏指数明显升高(P<0.05)。肝脏形态呈红黄相间,边缘变钝,易碎。病理切片显示肝索排列紊乱,肝细胞内出现气球样变性、局灶性坏死、炎性细胞浸润等病理改变。肝脏血清中ALT、AST、m-AST和GDH水平显著升高(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中酒精代谢酶ADH和CAT活性下降(P<0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px活性下降(P<0.01),非酶抗氧化GSH活性降低(P<0.01),脂质过氧化终产物MDA含量上升(P<0.01),肝脏内CYP2E1和Nrf2的蛋白表达水平上升(P<0.01)。
2.与模型组比较,单方应用溪黄草、英德红茶及英德红茶和溪黄草复合饮均能够显著预防并改善急性酒精损伤后的肝脏状态,降低血清ALT、AST、m-AST和GDH的血清指标的水平(P<0.01,P<0.05),提高肝脏组织中的酒精相关代谢酶ADH和CAT(P<0.01,P<0.05),增加抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性(P<0.05,P<0.01),提高非酶抗氧化GSH的活性(P<0.01),降低脂质过氧化终产物MDA的含量(P<0.05),抑制酒精对CYP2E1的诱导(P<0.01),激活Nrf2蛋白的表达(P<0.01,P<0.05)。
3.英德红茶和溪黄草复合饮对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能血清ALT、AST、m-AST和GDH的抑制程度优于单方应用溪黄草,其中对AST抑制的差异程度存在统计学意义(P<0.05);对AST、GDH的抑制程度优于单方应用英德红茶;对肝脏相关酶ADH的促进作用优于单方应用溪黄草,对CAT、SOD、GSH-Px的促进作用优于单方应用英德红茶,其中对SOD促进的差异程度存在统计学意义(P<0.05);对脂质过氧化终产物MDA的抑制程度优于单方应用英德红茶,但差异程度不存在统计学意义(P>0.05)。
结论:英德红茶和溪黄草复合饮对急性酒精性肝损伤的预防效果显著,表现为能够有效维持肝脏状态;降低ALT、AST、m-AST和GDH等血清指标活性;增强酒精相关代谢酶(ADH、CAT)、抗氧化酶(SOD、GSH-Px)、非酶抗氧化(GSH)的活性;抑制脂质过氧化终产物MDA的上升;抑制酒精诱导的CYP2E1表达,且整体效果优于单方应用溪黄草和英德红茶;上调Nrf2在肝脏的表达水平,具有激活作用。
方法:取60只SPF级健康雌性昆明种小鼠,随机分为(1)第1组为空白对照组(空白组),(2)第2组为急性酒精性肝损伤组(模型组),(3)第3组为保肝药物组(水飞蓟宾组),(4)第4组为溪黄草组(4g生药/kg),(5)第5组为英德红茶组(20g生药/kg),(6)第6组为英德红茶和溪黄草复合饮组(4g溪黄草生药/kg+20g英德红茶生药/kg)。3~6组小鼠按0.1ml/10g体重灌胃给药,1~2组给等体积蒸馏水,1次/d,共10d,每次给药后1h,除空白组外的其他各组小鼠按0.1ml/10g灌胃给予52°白酒造模,1次/d,共10d。实验结束末,小鼠眼球取血并及时摘除肝脏称取全肝湿重。肉眼观察各组小鼠的肝脏形态变化,光镜下观察肝组织病理形态变化并评分;测定血清ALT、AST、m-AST、GDH值;测定肝脏酒精相关代谢酶ADH、CAT,抗氧化酶SOD、GSH-Px,非酶GSH,脂质过氧化终产物MDA值;蛋白质印迹法(WesternBlot,WB)检测肝脏组织CYP2E1和Nrf2蛋白的表达。
结果:1.与空白组比较,模型组小鼠肝脏指数明显升高(P<0.05)。肝脏形态呈红黄相间,边缘变钝,易碎。病理切片显示肝索排列紊乱,肝细胞内出现气球样变性、局灶性坏死、炎性细胞浸润等病理改变。肝脏血清中ALT、AST、m-AST和GDH水平显著升高(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中酒精代谢酶ADH和CAT活性下降(P<0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px活性下降(P<0.01),非酶抗氧化GSH活性降低(P<0.01),脂质过氧化终产物MDA含量上升(P<0.01),肝脏内CYP2E1和Nrf2的蛋白表达水平上升(P<0.01)。
2.与模型组比较,单方应用溪黄草、英德红茶及英德红茶和溪黄草复合饮均能够显著预防并改善急性酒精损伤后的肝脏状态,降低血清ALT、AST、m-AST和GDH的血清指标的水平(P<0.01,P<0.05),提高肝脏组织中的酒精相关代谢酶ADH和CAT(P<0.01,P<0.05),增加抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性(P<0.05,P<0.01),提高非酶抗氧化GSH的活性(P<0.01),降低脂质过氧化终产物MDA的含量(P<0.05),抑制酒精对CYP2E1的诱导(P<0.01),激活Nrf2蛋白的表达(P<0.01,P<0.05)。
3.英德红茶和溪黄草复合饮对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能血清ALT、AST、m-AST和GDH的抑制程度优于单方应用溪黄草,其中对AST抑制的差异程度存在统计学意义(P<0.05);对AST、GDH的抑制程度优于单方应用英德红茶;对肝脏相关酶ADH的促进作用优于单方应用溪黄草,对CAT、SOD、GSH-Px的促进作用优于单方应用英德红茶,其中对SOD促进的差异程度存在统计学意义(P<0.05);对脂质过氧化终产物MDA的抑制程度优于单方应用英德红茶,但差异程度不存在统计学意义(P>0.05)。
结论:英德红茶和溪黄草复合饮对急性酒精性肝损伤的预防效果显著,表现为能够有效维持肝脏状态;降低ALT、AST、m-AST和GDH等血清指标活性;增强酒精相关代谢酶(ADH、CAT)、抗氧化酶(SOD、GSH-Px)、非酶抗氧化(GSH)的活性;抑制脂质过氧化终产物MDA的上升;抑制酒精诱导的CYP2E1表达,且整体效果优于单方应用溪黄草和英德红茶;上调Nrf2在肝脏的表达水平,具有激活作用。