论文部分内容阅读
鉴于线粒体在细胞中的重要地位,它与细胞能量代谢及细胞分化、凋亡、自噬等功能无不相关,线粒体功能的紊乱与包括癌症在内的人类诸多疾病也有紧密联系,因此线粒体DNA损伤修复机制一直是科学家们的关注热点。跨损伤DNA合成(TLS)是细胞核DNA损伤修复的一个重要机制,它可以通过在被阻滞的复制叉处募集易错性聚合酶将高保真聚合酶替换,从而使DNA继续复制,避免细胞死亡。尽管有科学家通过体外实验发现线粒体蛋白组分中含有核TLS相关蛋白RAD18,但它是否参与线粒体TLS仍是未知的,我们通过研究TLS机制中的重要蛋白REV1对线粒体功能的影响,来探讨线粒体中是否存在TLS这一修复机制,或者提供一些思考。并且近年来,基因组编辑技术一直走在国际生命科学研究的前沿,常用的基因组编辑技术是锌指核酸酶(ZFN)、转录激活样效应子核酸酶(TALEN)及成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9),CRISPR/Cas9的起源来自于细菌的获得性免疫,是一个高效、经济的实验手段。本研究通过利用CRIPSR/Cas9基因组编辑技术来对我们的目的基因REV1进行改造,以达到将其敲除的目的,为本课题组未来使用CRISPR/Cas9这一技术对其他基因的研究打下基础。