NO处理对采后莲雾果实木质素代谢调控机制的研究

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本文选用台湾“黑珍珠”莲雾(Syzygium samarangense Merr.et Perry)果实为实验材料,研究一氧化氮(Nitric oxide,NO)处理对采后莲雾果实生理品质变化及木质素代谢的影响,并从莲雾转录组中筛选克隆得到2个参与莲雾木质素合成的MYB基因。在此基础上,通过莲雾中表达模式分析和拟南芥中功能分析对MYB转录因子进行功能鉴定,探究MYB转录因子在莲雾木质素合成的分子调控中的作用,旨在为NO处理对采后莲雾果实木质素代谢的分子调控机制提供理论基础。本研究主要结果如下:1.本研究采用了10和0μl/L(对照组)NO熏蒸处理采后莲雾果实。结果表明:采后莲雾果实贮藏期间,絮状绵软指数和失重率逐渐上升,果肉硬度逐渐下降。此外,木质素含量上升,苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)及4-香豆酸-辅酶A连接酶(4CL)活性变化整体呈上升趋势。与对照组相比,NO处理可以延缓果实的木质素代谢,但不影响木质素中酚羟基的含量,并且抑制PAL、POD和4CL活性的上升。2.本研究从莲雾转录组中挖掘出了10个参与木质素生物合成的bona fide基因,并对其进行了表达特性分析。结果显示:除了CAD之外,剩余9个基因的表达量在贮藏期间呈增加趋势,但NO处理组的增加趋势缓于对照组。说明NO可能通过抑制木质素合成途径中关键酶基因的表达量,进而调控木质素的生物合成。此外,这些基因大多受到MYB转录因子的调控。3.从转录组筛选并克隆得到莲雾MYB转录因子SsMYB4和SsMYB330。生物信息学分析显示2个基因均含有MYB特征结构域,可能参与木质素生物合成。表达分析显示,SsMYB4在贮藏期间表达量降低,而NO处理上调其基因表达;而SsMYB330表达量不断增加,NO处理抑制其表达量的增加。推测SsMYB4作为抑制子参与了木质素的生物合成,而SsMYB330主要对木质素生物合成的作用有限。4.本研究构建了2个植物过表达载体,并利用农杆菌转化到拟南芥中进行功能分析。结果显示:在拟南芥中,SsMYB4过表达导致了转基因植株表型变化,细胞壁变薄,木质素、纤维素和半纤维素含量下降,转基因植物中木质素合成相关酶基因的表达量显著下降,推测SsMYB4对拟南芥的木质素生物合成具有负调控作用;过表达SsMYB330并没有明显影响转基因植株的表型及细胞壁变化。木质素、纤维素和半纤维素含量及木质素合成相关酶的基因表达量仅出现较小的下调,推测SsMYB330对木质素生物合成虽具有负调控作用,但其作用强度有限。
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