【摘 要】
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目的:miR-378d分子是课题组前期通过用紫杉醇处理食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系筛选到的差异表达最显著的分子。本研究将阐明miR-378d抑制食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制,以
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目的:miR-378d分子是课题组前期通过用紫杉醇处理食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系筛选到的差异表达最显著的分子。本研究将阐明miR-378d抑制食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制,以及miR-378d表达水平与食管鳞癌患者预后的关系。方法:通过测序以及生物信息学分析筛选紫杉醇处理食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞后差异表达的miRNA,并寻找到差异最显著的分子miR-378d;通过原位杂交检测miR-378d的表达水平,分析miR-378d在食管癌中表达与临床病理学特征之间的关系;通过构建稳定过表达miR-378d-nc、mimics和inhibitor的慢病毒感染ESCC细胞株,采用不同浓度的顺铂或5-Fu进行处理来证实miR-378d增强化疗敏感性;通过Western Blot和RT-qPCR以及荧光素酶报告载体验证miR-378d直接靶向调控AKT1;通过Western Blot和免疫组织化学染色实验证实miR-378d通过调控AKT-β-catenin信号通路抑制ESCC的恶性表型。结果:ESCC患者较正常人的miR-378d显著下调,且有miR-378d高表达的患者预后好的特点。miR-378d显著下调后ESCC肿瘤细胞发生了上皮-间质转化(EMT)。耐药实验证明miR-378d增强化疗敏感性,Transwell侵袭实验表明miR-378d降低了肿瘤的迁移和侵袭能力,单克隆实验表明miR-378d降低了克隆形成能力;Western Blot及免疫组织化学染色实验证明miR-378d通过调控AKT-β-catenin信号通路促进化疗敏感和抑制侵袭。结论:miR-378d通过靶向AKT调控AKT-β-catenin信号通路,促进ESCC细胞化疗敏感、抑制克隆形成、抑制EMT和侵袭迁移,高表达miR-378d的患者预后好。
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