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短链脂肪酸(SCFAs)属于内源性物质,主要包括乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、2-甲基-丁酸、戊酸和异戊酸。人粪便样品中SCFAs的浓度含量可以反映出肠道菌群和疾病之间的关系。SCFAs在超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)分析中响应低,为了提高灵敏度、减少样品消耗、室温下反应、缩短分析时间和简化样品的制备步骤,本文建立和优化了一种衍生化方法,并进行了方法的验证,最后,将其应用于健康人和帕金森病(PD)患者的粪便样品中。在室温和反应时间20分钟的条件下,4-氨基甲基喹啉(AMQ)与SCFAs发生酰胺衍生化,生成稳定的SCFAs-AMQ。优化UHPLC-MS/MS条件,使其在反相C18柱上5.5分钟内全部分离,并使用正离子电喷雾电离模式的多反应监测进行数据采集。通过洗涤的方式制备相对空白基质,以制备质量控制(QC)样本。利用稳定同位素标记的乙酸-d4作为待测分析物乙酸的替代分析物。通过扣除乙酸本底的峰面积、乙酸-d4与乙酸之间的响应因子和乙酸-d4的校准曲线计算出在涡旋处理后粪便样品中乙酸的浓度。最后,将在涡旋处理后粪便样品中的SCFAs的浓度与涡旋比例(0.01 L/g)相乘,以计算出原粪便样品中SCFAs的浓度。方法验证表明,SCFAs在QC样本和定量下限(LLOQ)样本中批内和批间的准确度分别为85%-104%和90%-104%。SCFAs在QC样本和LLOQ样本中批内和批间的精密度分别为0.8%-4.6%和2.4%-9.6%。最重要的是,在稳定性实验中,发现原粪便样品需立即用乙醇进行预处理,之后将其在室温(24小时内)、4°C(24小时内)和-80°C(253天内)条件下保存或运输到分析实验室。将该分析方法应用于健康人和PD患者粪便样品中。通过与文献报道的健康人粪便样品中SCFAs的浓度比较,证明该方法的可靠性。将健康人和PD患者进行比较,发现PD患者粪便样品中乙酸和丁酸的浓度呈减少的现象,而异丁酸、2-甲基-丁酸、戊酸和异戊酸的浓度与之相反,丙酸并无明显的变化差异。本文提供了一种新的衍生化方法,可使用UHPLC-MS/MS对人粪便中的SCFAs进行精确、准确和快速的定量。该方法成功地应用于健康人和PD患者的粪便样品中。