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猪繁殖与呼吸综合征是影响养猪业的主要病毒性疾病之一,也是全球猪病防治上的一大难题,疫苗免疫是预防猪繁殖与呼吸综合征的主要措施。目前生产中推荐使用的猪繁殖与呼吸综合征疫苗主要是灭活苗和弱毒苗,但是灭活苗免疫效果不明显,弱毒苗虽然表现出一定的免疫效果,但存在毒力返强、散毒等一系列问题。PRRS感染的显著特点是抑制IFN-γ和IL-12的产生,从而抑制机体的细胞免疫,为了更有效的提高疫苗免疫效果,寻找一种有效的免疫佐剂,本研究结合PRRS感染的特点,探讨了IL-12联合雷帕霉素对猪繁殖与呼吸综合征弱毒苗和多肽苗免疫小鼠后诱导的体液免疫和细胞免疫的影响,为猪繁殖与呼吸综合征提供一种新型疫苗佐剂。
本试验选择了两种疫苗,一种是市售的PRRS弱毒疫苗,另一种是本实验室正在研究的PRRS多肽疫苗。
首先,用猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫小鼠,同时连续三天注射IL-12和不同剂量的雷帕霉素,通过ELISA试剂盒检测免疫后7、28、56天小鼠血清IFN-γ的分泌,采用MTT法检测小鼠免疫后第4、30、60天脾脏淋巴细胞的增殖,通过流式细胞术检测了记忆性CD8+T细胞表面标记的变化,采用微量中和试验检测免疫后4、6、8周小鼠血清中和抗体水平。结果发现,IL-12联合低剂量的RAPA(100μg/kg)可以促进脾脏淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌,提高记忆性CD8+T细胞的数量,对弱毒苗免疫后机体细胞免疫水平具有增强作用。在体液免疫方面,仅第Ⅲ组于免疫后第8周有一只小鼠产生可检测的中和抗体(1:8),其余各组均没有检测到中和抗体,表明其对体液免疫没有明显作用。
其次,猪繁殖与呼吸综合征多肽疫苗免疫小鼠,同时连续三天注射IL-12和不同剂量的雷帕霉素,通过ELISA试剂盒检测免疫后7、28、56天小鼠血清IFN-γ的分泌,采用MTT法检测小鼠免疫后第4、30、60天脾脏淋巴细胞的增殖,通过流式细胞术检测了记忆性CD8+T细胞表面标记的变化,采用微量中和试验检测免疫后4、6、8周小鼠血清中和抗体水平。结果发现,IL-12联合低剂量的RAPA(100μg/kg)可以促进脾脏淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌,提高记忆性CD8+T细胞的数量,对多肽苗免疫后机体细胞免疫水平具有增强作用。在体液免疫方面,仅发现试验组Ⅱ、V于免疫后第8周各有一只老鼠产牛可检测的中和抗体(1:8);其余各组小鼠均未检测到中和抗体,表明其对体液免疫没有明显作用。
本试验以IL-12和RAPA作为PRRS疫苗佐剂,发现IL-12联合低剂量的RAPA(100μg/kg)可以加强疫苗的细胞免疫效果,具有较好的佐剂效果。