B型流感病毒(IBV)是引发季节性流感的主要病原,与A型流感病毒(IAV)宿主广泛不同,IBV主要感染人和少数哺乳动物,极少有禽类自然感染的报道。IBV聚合酶组成虽然与IAV相似,但其复制机制及在种间限制中的作用存在诸多未知。本研究在前期发现,哺乳动物细胞ANP32基因缺失导致IBV聚合酶活性显著下降从而影响病毒复制,且禽类ANP32蛋白支持IBV复制能力显著低于哺乳动物ANP32蛋白,提示ANP32蛋白在支持IBV复制方面存在种间差异。为明确其内在分子机制,本研究聚焦ANP32蛋白支持IBV聚合酶复制的分子机制,比较哺乳动物和禽类ANP32蛋白关键活性位点,解析禽类ANP32蛋白无法支持IBV复制的分子基础。本研究增进了对B型流感病毒聚合酶工作机制及宿主适应机制的理解。本研究发现,哺乳动物ANP32A&B蛋白可以完全支持B型流感病毒聚合酶复制,禽类ANP32A由于有33个氨基酸的插入,禽类ANP32B由于129/130位点的突变,导致禽类ANP32A&B均无法有效支持B型流感病毒的复制。本研究还发现与无法支持A型流感病毒聚合酶活性不同,哺乳动物ANP32E蛋白对B型流感病毒聚合酶活性有一定的支持作用,禽类ANP32E由于有10个左右氨基酸的插入,导致禽ANP32E对病毒的支持活性远低于哺乳动物ANP32E。为进一步探索不同物种ANP32蛋白支持B型流感病毒聚合酶活性差异的分子机制,本研究利用Co-IP,SPR等技术检测发现,禽类ANP32B由于129/130位点的差异,导致其结合病毒聚合酶的能力显著低于哺乳动物ANP32B,而禽类ANP32A由于33个氨基酸的插入,导致其与病毒聚合支持B型流感病毒的复制。本研究首次揭示了哺乳动物ANP32家族蛋白是支持B型流感病毒复制的关键宿主蛋白,并明确了禽类ANP32蛋白无法有效支持病毒聚合酶活性的分子机制。对理解B型流感病毒聚合酶功能和作用机理和宿主范围决定因素具有重要意义,同时可为抗B型流感病毒药物靶点设计和跨物种传播的防控提供理论依据。