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本文以鮟鱇鱼（Lophius litulon）鱼鳔为原材料,采用蛋白酶酶解工艺制备抗氧化肽酶解物,通过膜超滤、凝胶色谱、高效液相色谱等分离纯化技术制备抗氧化肽。并深入研究不同抗氧化肽（A1-A18）对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）细胞模型保护作用机理。研究内容及结果如下:（1）鮟鱇鱼鱼鳔抗氧化肽的制备:以DPPH自由基清除率为指标,对蛋白酶的种类及酶解条件进行工艺优化。先将鮟鱇鱼鱼鳔分别在胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶,碱性蛋白酶和风味蛋白酶的最适宜条件下进行酶解,筛得木瓜蛋白酶酶解产物对DPPH自由基的清除率最高（43.09±1.69%）;进而对木瓜蛋白酶酶解鱼鳔的最适条件进行优化,选取酶解时间、温度、pH、加酶量和料液比五个酶解条件进行单因素实验。根据结果,设计正交优化实验,得出木瓜蛋白酶最佳酶解条件为:温度65℃、时间5 h、pH 7.5和加酶量2.5%。在最优酶条件下,制备酶解液的DPPH自由基的清除率为47.13±1.15%;并取酶解液进行超滤,分子量＜1 kDa的酶解液组分活性最好,对其依次经Sephadex G-15凝胶柱和高效液相色谱分离纯化,获得18条寡肽（A1-A18）。经质谱和氨基酸N端序列分析确定其氨基酸序列和分子量依次为:Tyr-Asp-Tyr-Asp（A1,574.54 Da）、Gln-Asp-Tyr-Asp（A2,539.49 Da）、Ala-Gly-Pro-Ala-Ser（A3,401.41 Da）、Gly-Pro-Gly-Pro-His-Gly-Pro-Ser-Gly-Pro（A4,858.89 Da）、Gly-Pro-Lys（A5,300.35 Da）、His-Arg-Glu（A6,440.45 Da）、Gly-Arg-Trp（A7,417.46 Da）、Ala-Arg-Trp（A8,431.49 Da）、Gly-Pro-Thr-Glu（A9,402.40 Da）、Asp-Asp-Gly-Gly-Lys（A10,490.47 Da）、Ile-Gly-Pro-Ala-Ser（A11,443.49 Da）、Ala-Lys-Pro-Ala-Thr（A12,486.56 Da）、Tyr-Pro-Ala-Gly-Pro（A13,503.54 Da）、Asp-Pro-Thr（A14,331.32 Da）、Phe-Pro-Gly-Pro-Thr（A15,517.57 Da）、Gly-Pro-Gly-Pro-Thr（A16,427.45 Da）、Gly-Pro-Thr（A17,273.29 Da）和Asp-Pro-Ala-Gly-Pro（A18,455.46 Da）。自由基清除实验证明:18 条寡肽中,A2、A8和A13的半数清除率（EC50）均小于其他寡肽,活性较好。而且A2、A8和A13对 DPPH 自由基的 EC50分别为:2.993±0.054、0.773±0.003 和 2.821±0.012 mg/mL;对羟基自由基的 EC50分别为:2.337±0.016、4.503±0.040 和 3.839±0.102 mg/mL;对O2-.的 EC50 分别为:0.1120±0.0028、0.1273±0.0002 和 0.1069±0.0002 mg/mL;对ABTS.的 EC50分别为:0.1769±0.035、0.1827±0.0016 和 0.1900±0.010 mg/mL。A1-A18稳定性研究:模拟体外酸碱、高温及胃肠道消化环境,探究不同环境对A1-A18在抗氧化活性上的影响。实验结果表明,A1-A18在25-100℃温度下均可保持较好的抗氧化活性;但随着pH值升高至11或降低至5以下时,A1-A18的自由基清除率均有下降的概率;经胃、胰蛋白酶消化4h后,A1-A18抗氧化活性均有一定程度上的下降。因此,极碱极酸及胃肠道消化环境将显著影响A1-A18的抗氧化活性。（2）鮟鱇鱼鱼鳔抗氧化肽对NAFLD细胞模型脂质堆积的保护机理研究:采用游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）,建立细胞NAFLD模型,研究A1-A18对NAFLD细胞模型脂质堆积的保护作用。结果表明:在200μM浓度处理24 h后,A2、A8、A10、A13和A18对HepG2细胞显示出较强的保护能力。通过油红O染色观察显示A2、A8、A10、A13和A18均能显著减少FFA诱导的HepG2细胞内脂质堆积;且在50-200 μM浓度下能一定程度地减少TG和TC的含量,效果呈剂量依赖性。作用机制研究显示A2、A8、A10、A13和A18均能影响总调控因子AMPK磷酸化蛋白表达;抑制脂肪生成关键因子SREBP-lc的表达,同时上调PPAP-α和CPT-1的蛋白表达,促进脂肪酸β氧化。综上,A2、A8、A10、A13和A18既能下调成脂蛋白,又能促进脂肪酸β氧化,减少脂质的生成,具有较好的降脂活性。（3）鮟鱇鱼鱼鳔抗氧化肽对NAFLD细胞模型氧化应激的保护机理研究:研究A2、A8、A10、A13和A18对氧化应激水平的影响。将1.0 mM FFA与A2、A8、A10、A13和A18共同处理24h,结果表明:A2、A8、A10、A13和A18能够抑制FFA诱导的HepG2细胞内活性氧（ROS）水平的增加;显著提高下游抗氧化物酶（CAT、SOD和GSH-PX）的活力;降低脂质过氧化产物MDA的含量。作用机制研究发现A2、A8、A10、A13和A18对HepG2细胞内氧化应激的调节作用主要通过增强抗氧化因子Nrf2和HO-1途径实现。综上,鮟鱇鱼鱼鳔抗氧化肽具有清除自由基、减轻HepG2细胞内脂质堆积和氧化应激的作用,可用于抗氧化和降脂活性药物开发的候选成分,有望用于预防和治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）。本课题研究为海洋活性物质开发提供数据支持,为食源性抗氧化肽相关保健品及相关医药产品研发提供理论依据。