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背景与目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的病理改变是黑质-纹状体内的多巴胺神经元变性,多巴胺缺乏是其最主要生化缺陷。如果局部植入新的细胞替代这些变性的神经细胞,以弥补帕金森病的生化缺陷,就能达到治疗的目的。因此一直以来PD是被认为最有可能应用于细胞治愈的疾病。早期应用胎儿多巴胺能神经元等细胞的替代治疗能够获取一定的疗效。但实际应用较为困难。而近年来骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向神经细胞分化的潜能以及来源广泛、无伦理及免疫排斥等方面的独特优势,使其获得了更多的关注。但如何有效促使MSCs向神经元分化,尤其向多巴胺表型神经元分化,值得进一步研究。 本实验旨在建立大鼠MSCs的分离、培养、纯化和鉴定技术,观察不同诱导条件对MSCs向神经元样细胞分化的影响,并筛选优化分化条件。 方法:大鼠股骨中分离出MSCs,贴壁法体外扩增、传代,尿嘧啶脱氧核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)标记检测其增殖特性,流式细胞术检测细胞表面标志CD11b和CD45表达以与造血干细胞鉴别。以巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)/丁羟茴醚(butylated hydroxyanisole,BHA)诱导MSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学检测分化细胞的巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuro-specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acaidic protein,GFAP)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)、γ-氨基丁酸(g-aminobutyric acid,GABA)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达,以确定其分化细胞特性。在此基础上,观察三七总皂甙(total Panax notoginseng saponins,tPNS)/维甲酸(retinoic acid,RA)对MSCs向神经元样细胞分化诱导作用,应用统计学分析不同诱导条件的分化差异,以筛选有效分化条件。 结果:(1) MSCs分离、培养、纯化和鉴定:大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并