OsTIL2在水稻耐热性与脂质代谢中的功能鉴定

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气候变暖背景下,全球范围内温度普遍升高,极端温度严重影响了植物全生育期的生长发育。为了应对高温胁迫,水稻进化出多重耐性机制,降低细胞内活性氧(ROS)水平,以保持细胞膜系统的稳定性,提高对高温的耐受性。因此,研究水稻在高温胁迫下的作用机制具有非常重要的理论和应用意义。在植物中,温度诱导的载脂蛋白(TILs,temperature-induced lipocalins)是一类在真核细胞中高度保守和脂类结合和转运蛋白,该蛋白在植物对不同生物和非生物胁迫响应中发挥重要作用。本论文以OsTIL2超表达和基因编辑纯合株系为材料,考察了转基因株系的农艺性状,鉴定了水稻全生育期(萌发期、苗期和开花期)的耐热性,研究了OsTIL2在高温胁迫下的抗氧化酶活性及其脂质组变化,主要研究结果如下:1.OsTIL2(LOC_Os08g34150)编码179个含有氨基酸残基的蛋白质。该蛋白定位于水稻原生质体的细胞膜和细胞质中。OsTIL2在水稻幼苗中受高温上调表达。2.在正常条件下,OsTIL2不影响水稻生长发育和产量。在2021年大田种植下,3个纯合超表达株系(OE-1,OE-3和OE-9)和3个基因编辑纯合株系(C-2、C-3和C-10)与野生型的株高、穗长、有效分蘖数、穗粒数、结实率及千粒重无明显差异。3.OsTIL2负调控水稻全生育期的耐热性。在萌发期,对照处理(30℃处理7 d)条件下,各株系根长与芽长差异不明显。经40℃处理2 d,OsTIL2超表达和基因编辑株系的根长和芽长较野生型差异显著;在幼苗期,14 d水培幼苗42℃处理2 d后28℃恢复7 d,与野生型存活率相比,OsTIL2超表达株系存活率降低,而基因编辑株系存活率较高;开花后10 d进行高温37℃/30℃(昼/夜)处理10 d,OsTIL2超表达株系耐热指数低于野生型,OsTIL2基因编辑株系的耐热指数高于野生型。4.生理指标测定结果表明,在正常条件下,OsTIL2超表达、基因编辑株系与野生型在苗期和开花期的生理指标无显著差异。在高温胁迫下,OsTIL2基因编辑株系SOD、POD、APX和CAT的酶活高于野生型和超表达株系;与野生型相比,OsTIL2超表达株系可溶性糖含量较低,而基因编辑株系的可溶性糖含量较高;OsTIL2基因编辑株系MDA、H2O2含量低于野生型和超表达株系,苗期和开花期结果一致,表明OsTIL2负调控水稻的耐热性。5.利用UPLC-MS/MS测定了苗期OsTIL2脂类代谢变化。结果表明,常温条件下,转基因株系与野生型的脂质种类和含量无明显差异。高温胁迫下,各株系脂质总含量降低,但降低程度不同。高温胁迫下,与野生型和基因编辑株系相比,OsTIL2超表达株系的DBI更高,ACL更短,说明膜脂流动性更强,更不耐高温。相关性分析显示,DAG36:6、PA36:6、MGDG36:6、DGDG36:6组分与脂质DBI显著正相关,36:2甘油磷脂与膜脂DBI显著正相关。结果表明,OsTIL2主要影响了高温下36:6甘油糖脂和36:2甘油磷脂含量,从而负调控水稻的耐热性。
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