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贯叶连翘 Hypericum perforatum Linn 为藤黄科 Garcinia 金丝桃属Hypericaceae 植物,是我国传统的中药材,在欧洲及美国被称为圣约翰草St.John’wort,用于治疗抑郁症有几百年的历史。近几年研究发现,贯叶金丝桃素是贯叶连翘中抗抑郁的主要活性成分。本文对贯叶金丝桃素的定性定量分析方法和提取纯化方法进行了研究。本文主要研究内容如下: 1)建立了一个新的贯叶金丝桃素的高效薄层色谱和薄层色谱定性分析方法,为国内首次报道。薄层色谱的最佳条件为:以薄层层析硅胶 GF254 为固定相,以正己烷-乙酸乙酯 (5:1,v/v)为展开剂,贯叶金丝桃素的 Rf值为 0.41。 2)建立了一个新的贯叶金丝桃素的反相高效液相色谱定量分析方法。高效液相色谱的分析条件为:固定相为 Alltima C18柱;A 溶液:80%甲醇+1%乙酸,B 溶液:甲醇,采用梯度洗脱:0min～10min ,0%B～100%B;10min～40min,100%B;流速为 1mL/min;柱温为 30℃;检测器为 UV 检测器(270nm)。贯叶金丝桃素可达到基线分离的要求,它的保留时间为14.0min。线性方程为:M=10.3238 A-0.01332,相关系数 r=0.9993,线性范围 0.5-10μg,精密度 RSD=1.14%,平均回收率为 98.34%,当信噪比为 3:1 时,最小检测限为 7.34×10-7μg。 3)进行了贯叶金丝桃素的提取和粗分离方法的研究。采用超声波强化提取的方法。采用薄层制备色谱对贯叶连翘粗提物中的贯叶金丝桃素进行纯化。最佳制备薄层色谱条件为:固定相为薄层层析硅胶 GF254,展开剂为正己烷-乙酸乙酯(4.5:1,v/v),纯化后贯叶金丝桃素样品的纯度为 76.64%。进行了用常压硅胶柱层析技术分离制备贯叶金丝桃素的研究,优化了分离条件,以柱层析硅胶为固定相,以正己烷-乙酸乙酯(6:1,v/v)为流动相进行洗脱,分步收集,合并相同组分。得到的贯叶金丝桃素样品的纯度为 61.14%。 4)首次采用干柱层析对贯叶连翘粗提物中的贯叶金丝桃素进行纯化,该方法国内外尚未见报道。固定相为薄层层析硅胶 GF254,流动相为正己烷 I<WP=7>-乙酸乙酯(4.5:1,v/v)。纯化后的贯叶金丝桃素样品的纯度为 72.13%。5)使用制备薄层色谱法和加压型制备液相色谱联用的方法制备高纯度贯叶金丝桃素样品。其纯度大于 98%。6)采用 ESI-MS 对样品进行分析鉴定。样品的 MS 谱与文献中贯叶金丝桃素 MS 谱一致,可确定制备的样品为贯叶金丝桃素,并且提出了贯叶金丝桃素分子的可能裂解过程。