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氧化应激(Oxidative Stress, OS)被认为是与多种老年神经退行性疾病,如阿尔兹海默病(Alzheimer Disease, AD)及轻度认知功能损害(mild cognitive impairment, MCI)等疾病的发病过程中的重要因素之一。阿尔兹海默病目前仍无有效的治疗手段,轻度认知功能损害是阿尔兹海默病发生的早期阶段,若针对轻度认知功能损害这一阶段给予干预治疗,可能会延缓或终止其向阿尔茨海默病发展的进程。如果能针对氧化应激这一重要危险因素,给予抗氧化干预,从而改善轻度认知功能损害患者的认知功能,会从一定程度上降低罹患阿尔茨海默病的风险,故抗氧化应激损伤已成为改善与治疗轻度认知功能损害及阿尔茨海默病的新思路及新靶点。在祖国医学中,氧化应激损伤属于“衰老”范畴,而由氧化应激导致的认知功能障碍可被认为是“脑衰老”。中医药在脑衰老的预防及治疗方面均有独特优势,而且前景良好。补肾祛瘀化痰法组方(通脉益智胶囊)基于脑衰老“虚、痰、瘀”的病理机制,以补肾祛瘀化痰为法,方以女贞子、何首乌、丹参、赤芍、石菖蒲、远志及漏芦等中药组成。前期动物研究及临床研究均表明,补肾祛瘀化痰法对血管性痴呆、动脉粥样硬化等疾病具有良好的疗效。[目的]通过临床观察及动物实验,评估补肾祛瘀化痰法对认知功能及氧化应激水平的影响及疗效。探讨氧化应激损伤对认知功能的影响,并讨论中医药防治脑衰老的病因病机。[方法]临床观察部分,观察补肾祛瘀化痰法治疗及生活方式干预对84例轻度认知功能损害入组患者认知功能及氧化应激水平的影响,采用简易精神状态检查量表(MMSE)及蒙特利尔认知评估中文版(MoCA)来对比入组MCI患者认知功能在干预前后的变化；并抽取空腹静脉血检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)等指标,以明确干预前后患者体内抗氧化水平的变化。动物实验部分,8周龄清洁级雄性ApoE基因敲除小鼠32只,随机平均分成4组,分别为成年中药组、老年中药组、成年模型组、老年模型组；8周龄相同遗传背景雄性C57BL/6J小鼠16只,随机平均分成2组,分别为成年正常组、老年正常组。成年组小鼠至20周起、老年组小鼠至32周起,中药组以通脉益智胶囊750mg/kg/d灌胃12周,模型组与正常组以同容积0.9%氯化钠注射液灌胃12周,均每日1次。在给药前后个进行一次跳台实验及避暗实验,给药后进行一次Morris水迷宫实验检测各组小鼠认知功能；行为学观察结束后处死,生化法检测脑组织氧化应激指标(SOD、 GSH-Px、MDA),免疫组化法检测脑组织8-羟基脱氧鸟苷含量,以评估小鼠氧化应激水平。[结果]1.跳台实验及避暗实验结果表明：成年组给药前(20周龄时),跳台实验及避暗实验结果均无明显差异(P>0.05),给药后(32周龄时)模型组小鼠较中药组及正常组小鼠的错误次数及逃避潜伏期均增多,具有明显差异(P<0.05)；老年组给药前(32周龄时)两项实验结果显示中药组及模型组小鼠均较正常组小鼠错误次数及逃避潜伏期均增多,具有明显差异(P<0.05),而给药后(44周龄时)中药组及正常组小鼠较模型组小鼠的错误次数及逃避潜伏期均显著减低(P<0.05,P<0.01)。2. Morris水迷宫实验结果表明：在定位航行实验中,第一天是各组小鼠逃避潜伏期成绩无明显差异(P>0.05),随着训练天数的增加,中药组及正常组逃避潜伏期较模型组有所降低;训练进行到第五天时,老年中药组及老年正常组与老年模型组相比,逃避潜伏期均显著减少(P<0.01),老年中药组与正常组无明显差异(P>0.05);而成年组中中药组及正常组逃避潜伏期成绩明显优于模型组,具有统计学差异(P<0.05),而中药组与正常组之间无明显差异(P>0.05)。到第六天正式测试时,其成绩趋势大致与第五天趋势相同。空间探索试验成绩中,与成年模型组相比,中药组及正常组穿台次数均显著增多(P<0.05),第Ⅲ象限游泳路程较模型组增多(P<0.05),而中药组与正常组之间无明显差异(P>0.05),中药组及正常组第Ⅲ象限时间停留时间虽较模型组延长,但三组并无统计意义(P>0.05)；老年组中,与中药组及正常组相比,模型组小鼠在穿台次数、第Ⅲ象限游泳路程及停留时间均显著缩短(P<0.01),而中药组及正常组无明显差异(P>0.05)。3.氧化应激水平检测结果表明：老年模型组的SOD含量明显降低,与老年正常组相比,有显著差异,P<0.05；与老年中药组相比,亦有明显差异P<0.01,老年正常组与老年中药组之间无明显差异,P>0.05。老年模型组的GSH-Px活力明显降低,与老年正常组相比,有显著差异,P<0.01；与老年中药组相比,亦有明显差异P<0.05,老年正常组与老年中药组之间无明显差异,P>0.05。而老年模型组MDA含量明显升高,与老年正常组相比,有显著差异,P<0.05,,与老年中药组相比,亦有差异(P<0.05),其他各组之间无明显差异。成年组8-羟基脱氧鸟苷表达均无明显差异,P>0.05。与老年正常组相比,老年模型组8-羟基脱氧鸟苷表达升高,有显著差异,P<0.01；而与老年中药组相比,老年模型组表达升高,有明显差异,P<0.05。4.甲苯胺蓝染色观察各组海马CA1区神经细胞排列及尼氏体分布情况结果表明：成年各组之间无明显差异,P>0.05。与老年正常组及老年中药组比较,老年模型组尼氏体表达数量均明显减少(P<0.01)；且平均光密度值明显降低(P<0.05)；显微镜下观察可见老年模型组较老年中药组、老年正常组的海马CA1区神经细胞排列松散,层次紊乱,细胞间隙较大,海马细胞层数少,可见部分神经细胞变性、坏死、凋亡5.入组患者基本情况：临床研究入组对象在性别、年龄、学历、体重指数、饮食情况、运动情况及既往病史等方面,两组均无明显差异(P>0.05)。但总体可见,入组患者以中学学历为主(P<0.05),体重指数正常的占多数(P<0.05),以清淡饮食为主,虽多数有规律或偶尔运动,但运动强度较低。6.中医证型评分：入组患者多数为复合证型,以肾精亏虚为主(P<0.05)；治疗前后对比中医证型评分可见,中药组在治疗后各中医证型得分均低于治疗前(P<0.01,P<0.05)；在中医证候疗效方面,中药组显著明显优于生活干预组(P<0.05),且在总体证候、单项症状及舌脉方面,中药组治疗后均优于治疗前及生活干预组(P<0.05)。7.量表评估：简易精神状态量表(MMSE)评分显示,中药组治疗后各项认知能力均较治疗前有明显提高(P<0.05)；生活干预组干预后各项均较前有所提高,但均无统计学差异(P>0.05)。蒙特利尔认知评估量表(MoCA)量表评分显示,中药组治疗后注意力显著提高(P<0.01),其他各项能力明显提高(P<0.05)；生活干预组治疗后注意力及定向力较前明显提高(P<0.05),其余各项均较前虽有所提高,但无统计学差异(P>0.05)。两组治疗后评分未见明显差异(P>0.05)。8.氧化应激水平：治疗前,中药组与生活干预组氧化应激水平无明显差异(P>0.05)。治疗后,中药组各项氧化应激指标有明显改善(P<0.05),且SOD、GSH-Px及MDA均与生活干预组亦有明显差异(P<0.05)；生活干预组中,MDA水平较治疗前明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平较治疗前有所上升,但并无明显差异(P>0.05)。[结论]1.跳台实验及避暗实验结论：无论ApoE基因敲除小鼠及同背景C57/BJ小鼠,在20周龄时,认知功能均无明显异常；而32周龄时,已出现明显的认知功能障碍。并且随着周龄的增加,模型组ApoE基因敲除小鼠认知功能有所减低,而中药组ApoE基因敲除小鼠与正常组小鼠认知功能无明显差异,说明补肾祛瘀化痰法对认知功能有一定改善作用。2. Morris水迷宫实验结论：与模型组小鼠比较,成年组(32周龄时)中药组及正常组小鼠学习能力及记忆能力均增强；而老年组(44周龄时)中药组及正常组小鼠学习能力及记忆能力亦较模型组小鼠显著增强。说明补肾祛瘀化痰法对改善学习能力及记忆能力方面具有一定功效。3.氧化应激水平检测结论：老年组(44周龄时)中药组及正常组小鼠氧化应激损伤与模型组相比显著减低；而成年组(32周龄时)亦有所减低,但不具有统计学差异。说明ApoE小鼠在32周龄时氧化损伤已出现,但水平不高；到小鼠44周龄时已出现明显的氧化损伤。说明补肾祛瘀化痰法对可在一定程度上降低氧化应激损伤。4.海马CA1区神经细胞排列及尼氏体分布情况结论：成年组(32周龄时)海马CA1区神经细胞排列及尼氏体分布情况尚可,未见明显异常；而老年组(44周龄时),小鼠海马CA1区神经细胞内尼氏体数量显著降低,且神经细胞排列松散,层次紊乱。说明补肾祛瘀化痰法对可改善认知障碍小鼠脑组织病理形态。5.入组患者基本情况：根据本研究调查结果表明,轻度认知功能损害主要发生在65岁至80岁之间的老年人中,这部分人群教育程度主要为中学,饮食情况良好,体重正常或超重,虽有锻炼但强度不够,部分有高血压、2型糖尿病及高脂血症等既往疾病。6.中医证型统计及评分：本研究中大部分患者为复合证型,即肾精亏虚合痰浊阻窍、肾精亏虚合瘀血阻络、痰浊阻窍合瘀血阻络及三证并见；其中肾精亏虚比例最高,符合老年人的中医证型。中药组治疗后在总体证型、单项症状及舌脉方面均较治疗前及生活干预组有明显改善,故说明补肾祛瘀化痰法组方对轻度认知功能损害患者中医证型积分有明显改善,生活方式干预虽然对MCI中医证型积分有一定改善,但其效果不如补肾祛瘀化痰法显著。7.量表评估：根据简易精神状态量表(MMSE)及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)在治疗前后得分可见：中药组治疗后在定向力、注意力、计算力、回忆能力、语言能力、视空间与执行能力等方面较治疗前均有明显改善生活干预组治疗后患者在注意力及定向力较前明显提高,但不显著。说明补肾祛瘀化痰法组方可显著增加轻度认知功能损害患者神经心理学量表评分,对MCI患者的定向力、注意力、计算力、回忆能力、语言能力、视空间与执行能力有显著改善；生活方式干预对以上能力有一定程度的改善,但效果不甚明显。8.氧化应激指标统计：中药组治疗后氧化应激水平明显降低,生活干预组除MDA水平明显降低外,其他指标无明显差异。说明补肾祛瘀化痰法组方可显著改善患者氧化应激水平；生活方式干预可在一定程度上改善氧化水平。