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流行性乙型脑炎病毒为一正链RNA病毒,病毒颗粒包括3个结构蛋白和7个非结构蛋白.目前认为,乙脑病毒的毒力主要与其E蛋白有关.流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA<,14>-14-2已在中国广泛用于乙脑的预防接种,其安全性和有效性已得到共识.为了更好地了解乙脑病毒SA14株的减毒机制,本试验首先将野毒株SA14株,减毒株SA<,14>-12-1-7、SA<,14>-9-7、SA<,14>-5-3、SA<,14>-14-2(PHK8代)在Vero细胞上连传2代,增高了病毒滴度;通过空斑试验对各毒株的病毒滴度进行了测定;然后分别进行小鼠脑内毒力、小鼠皮下毒力、乳鼠脑内返祖及免疫力试验.试验结果证明在SA14至SA<,14>-12-1-7株的减毒过程中,乙脑病毒的神经外毒力已消失,神经内毒力也明显下降,但当病毒在乳鼠脑内传一代时,神经内毒力迅速升高,LD<,50>可达6.0以上.SA<,14>-9-7株小鼠脑内注射已不发病,乳鼠脑内回传一代后,毒力没有明显升高,提示SA<,14>-12-1-7至SA<,14>-9-7的过程可能是神经内毒力进一步减弱的关键阶段.SA<,14>-5-3和SA<,14>-14-2(PHK8代)株则保持了这种低毒力的特性.该文用RT-PCR的方法分别扩增各毒株E基因,并进行了克隆、测序,继而对各毒株序列进行了比较.结果表明,SA14株与SA<,14>-12-1-7株间有4个氨基酸发生了改变(E-107,E-176,,E-325,,E-439),SA<,14>-12-1-7与SA<,14>-9-7株之间有3个氨基酸发生了改变(E-138,E-279,E-315).而SA<,14>-9-7株与SA<,14>-5-3株只有一个核苷酸NT-405不同,但未引起氨基酸改变.SA<,14>-14-2疫苗株除保留SA<,14>-12-1-7和SA<,14>-9-7所改变的7个氨基酸外,另有2个氨基酸发生了改变(E-177,E-264).根据以上结果,E-138(G1u→Lys),E-315(Ala→Val)和E-279(Lys→Met)的突变可能与神经内毒力的减弱有关,E-176(Ile→Val),E-439(Lys→Arg)和E-107(Leu→Phe)可能与神经外和神经内毒力减弱有关,在此基础上,该试验又对SA<,14>-14-2(PHK17代)和SA<,14>-14-2(鼠脑1代)的E区基因进行了序列测定.结果表明,乙脑病毒减毒活疫苗SA<,14>-14-2在PHK细胞上连传17代,仍然较稳定,没有发生回复突变.在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传一代后仅E-107一个氨基酸发生了回复,从生物学试验结果看,使毒力略有升高,但与野毒株相比仍很低.在疫苗的实际质控工作中,对上述与毒力相关的基因进行监测,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段.