【摘 要】
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近年来黑色素瘤的发病率呈现升高的趋势,目前仍然缺乏能够有效治疗黑素瘤的药物。天然化合物作为新药开发的来源,具有重要的研究价值。去氢木香内酯是木香根茎中的有效活性成分,对乳腺癌、咽喉癌等多种癌症均有一定的抑制作用,但是对黑色素瘤的相关研究却很少,其具体的作用靶点和机制也尚不明确。基于探针与质谱技术的化学蛋白质组学的发展,为阐明天然药物的靶标蛋白和作用机制提供了有力的技术支撑。化学蛋白组学能够实现痕量
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近年来黑色素瘤的发病率呈现升高的趋势,目前仍然缺乏能够有效治疗黑素瘤的药物。天然化合物作为新药开发的来源,具有重要的研究价值。去氢木香内酯是木香根茎中的有效活性成分,对乳腺癌、咽喉癌等多种癌症均有一定的抑制作用,但是对黑色素瘤的相关研究却很少,其具体的作用靶点和机制也尚不明确。基于探针与质谱技术的化学蛋白质组学的发展,为阐明天然药物的靶标蛋白和作用机制提供了有力的技术支撑。化学蛋白组学能够实现痕量蛋白的检测与鉴定,可以有效筛选出药物的靶点蛋白。因此,本课题目的在于探讨去氢木香内酯抗黑色素瘤的活性,并鉴定与其相互作用的靶标蛋白。以A375细胞为研究对象,首先从细胞增殖、凋亡、周期和迁移等多方面检测了去氢木香内酯的活性,并检测了相关蛋白的表达,以及细胞内MMP和ROS的变化。接着,设计并合成了带末端炔基二苯甲酮修饰的去氢木香内酯探针,并进行了质谱、核磁以及活性的表征。然后,利用合成的探针通过点击化学反应间接连接靶蛋白与生物素,并利用生物素-链霉亲和素系统钓取蛋白。最后利用新型iSIPL2-180/181标记试剂标记肽段,LC-MS/MS技术识别和鉴定出了靶蛋白。结果发现,去氢木香内酯抑制A375细胞的增殖,其作用24h的IC50=3.886±0.596μM。去氢木香内酯能够显著增加细胞内ROS含量,降低MMP,诱导A375细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期的阻滞,上调 A3 75 细胞内 p53、caspase-8、cleaved caspase-3 和 cleaved PARP蛋白,并使得Cyclin B1和CDK1蛋白下调。利用合成的化学探针,共鉴定出69个可能与药物直接作用的靶标蛋白。这些靶蛋白参与调控细胞的代谢、生存和死亡等多条信号通路,其中包括PI3K-AKT信号通路等。并且,从中筛选出了对去氢木香内酯发挥抗黑色素瘤活性最具影响力的核心蛋白,如ENO1、HSPA8和HSP90等。总之,去氢木香内酯在研究中表现出良好的黑色素瘤抑制活性,并且具有多个蛋白靶点。本课题首次研究了去氢木香内酯的抗黑色素瘤活性,并鉴定了其可能的靶蛋白,为阐明其作用机制奠定了研究基础,也为其将来作为临床抗肿瘤候选药物提供了理论依据。
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