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[目的]
研究p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPARγ、CK10、CK19在鼻咽癌细胞及鼻咽粘膜上皮细胞中表达的意义及关系,研究ERK信号通路阻滞剂PD98059对鼻咽癌细胞增殖的影响,探讨ERK/MAPK信号通路与鼻咽癌细胞增殖的关系。探讨细胞分化标志物CK10、CK19在鼻咽癌组织中表达的意义。
[方法]
采用免疫组化SP法检测36例鼻咽癌、22例鼻咽癌的自身对照鼻咽粘膜上皮及20例非自身对照鼻咽粘膜上皮中p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPARγ、CK10、CK19蛋白的表达。用不同浓度ERK信号通路阻滞剂PD98059(10μmol/L、50μmol/L、100μmoFL)处理鼻咽癌CNE-2Z细胞,Hoechst33342/PI荧光双染法观察细胞的凋亡;免疫细胞化学方法检测p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPArγ蛋白的表达;Westernblot方法检测Cyclin D1蛋白的表达。
[结果]
(1)22例有自身对照鼻咽粘膜上皮的鼻咽癌标本中,p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPARγ蛋白的阳性表达率分别为68.18％(15/22)、81.82%(18/22)、81.82%(18/22)、90.91%(20/22);在其自身对照的鼻咽粘膜上皮中,上述蛋白的阳性表达率分别为22.72%(5/22)、27.27%(6/22)、4.55%(1/22)、45.45%(10/22)。其中p-ERK、CyclinD1、Ki-67、PPARγ在鼻咽癌和自身鼻咽粘膜上皮组织中表达的差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。
(2)36例鼻咽癌组织中,p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPARγ、CK10、CK19的阳性表达率分别为69.44%(25/36)、80.56%(29/36)、80.56%(29/36)、83.33%(30/36)、47.22%(17/36)、86.11%(31/36);在20例非自身鼻咽粘膜上皮中的阳性表达率分别为20.00%(4/20)、5.00%(1/20)、10.00%(2/20)、55.00%(11/20)、35.00%(7/20)、85.00%(17/20)。36例鼻咽癌中,9例非角化性未分化癌CK10不表达,而CK19呈强阳性表达。卡方检验结果显示,pERK、Cyclin D1、Ki-67在36例鼻咽癌与20例非自身鼻咽粘膜上皮中的表达差异均有显著统计学意义(P＜0.01),PPAR7的表达差异有统计学意义(P＜0.05),CK10和CK19的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。相关分析结果表明,36例鼻咽癌中,p-ERK与CyclinD1、Ki-67、PPARγ蛋白的表达呈正相关(相关系数,分别为0.604,0.668,0.337,P值分别为0.000＜0.01,0.000＜0.01,0.045＜0.05);Cyclin D1与Ki67表达呈正相关(r=0.695,P=0.000＜0.01)。PPAR7与Ki-67、Cyclin D1均无相关性(相关系数r分别为0.277,0.328,P值分别为0.102,0.051,P＞0.05)。
(3)细胞形态观察:不同浓度PD98059作用于CNE-2Z细胞后,Hoechst33342/PI荧光双染可观察到凋亡细胞。
(4)免疫细胞化学结果显示:不同浓度PD98059作用于CNE-2Z细胞后,p-ERK、Cyclin D1、Ki-67、PPARγ蛋白的表达减少。
(5)Western blot结果显示:不同浓度PD98059作用于CNE-2Z细胞后,Cvdin D1蛋白表达减少。
[结论]
1.鼻咽癌组织及CNE-2Z细胞中存在p-ERK蛋白的高表达和活化异常,p-ERK可能通过上调Cyclin D1和Ki-67的表达,促进鼻咽癌细胞增殖。
2.不同浓度PD98059均可下调CNE-2Z细胞中Cyclin D1的表达,并可能与抑制CNE-2Z细胞增殖和诱导CNE-2Z细胞凋亡有关。
3.PPARγ在鼻咽癌组织及CNE-2Z细胞中高表达,可能与p-ERK蛋白的高表达和活化异常有关,可能间接参与促进鼻咽癌细胞增殖的过程。
4.CK19是否可作为鼻咽非角化性未分化癌的诊断标志物值得进一步探讨研究。