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家养绵羊尾脂的驯化机制至今尚不清楚。研究其脂尾的变异分化无论对于育种还是保种,均具有重要的理论意义。国内外对于脂尾羊的尾部脂肪组织的细胞形态及其尾脂沉积的分子机制研究有限,尤其是对尾脂沉积起决定性作用的差异转录组学的研究较少。本研究通过K-means聚类方法分析了巴什拜羊与野生盘羊杂交二代群体的尾脂分化以及体尺指数的变化;在此基础上,选择二代中脂尾显著分化的极端小尾群体以及典型肥尾类型巴什拜羊作为极端对照,分别采集两群体的尾部组织,进行转录组测序,筛选出7个与脂肪代谢相关的差异表达基因,采用组织切片染色法研究尾脂、皮下脂部位的脂肪细胞特性,运用实时荧光定量法分析了差异表达基因的组织表达特征。旨在鉴定调控绵羊脂尾形态的关键基因,为阐明绵羊尾脂变异的脂肪定向沉积调控机制提供理论依据。
研究主要结果如下:
1、杂交二代群体脂尾的形态分化研究
二代群体的脂尾出现了分化,共有小尾型、中尾型、大尾型和肥尾型4个类型,平均体积分别为312cm3,953.6cm3,1764.2cm3,2046cm3。肥尾型羊体长指数极显著大于小尾型(P<0.01);大尾型羊的体躯指数极显著大于小尾型(P<0.01);大尾型、肥尾型羊的胸围指数、胸指数极显著大于小尾型(P<0.01)。表明随着尾脂的分化,体型结构也发生了显著或极显著的变化。
2、不同群体的脂肪细胞形态学差异
平均直径、面积:巴什拜羊的尾脂、皮下脂细胞极显著大于二代羊(P<0.01);巴什拜羊的皮下脂细胞大于尾脂细胞,差异不显著(P>0.05),二代羊皮下脂细胞极显著大于尾脂细胞(P<0.01)。尾脂面密度:巴什拜羊极显著大于杂交二代羊(P<0.01);皮下脂面密度:杂交二代羊极显著大于巴什拜羊(P<0.01);巴什拜羊皮下脂显著高于尾脂(P<0.05),杂交二代羊的皮下脂极显著高于尾脂(P<0.01)。
3、转录组数据差异表达基因分析
按照p≤0.05且表达差异倍数|log2FC|≥1的标准进行筛选,共得到873个差异表达基因(DEGs),其中上调基因590个,下调基因283个。进一步进行GO及KEGG分析,选择与脂肪代谢相关的通路及基因,从中筛选出7个关键基因。
4、对7个差异表达基因进行组织表达验证
分别对两群体的11个部位的组织进行定量分析。群体内部位间分析:SCD基因在巴什拜羊肝脏中表达最高(P<0.01),在二代羊皮下脂表达最高(P<0.01);ESR1、EMR1、GPAM基因在背最长肌的表达最高(P<0.01);PHYH基因在肝脏表达最高(P<0.01);STAT3基因在背最长肌、股四头肌表达最高(P<0.01);ALDH1A1基因在小肠表达最高(P<0.01)。
群体间同部位表达差异:SCD基因在二代羊尾脂表达极显著低于巴什拜羊(P<0.01);ESR1、EMR1基因在二代羊尾脂的表达显著低于巴什拜羊(P<0.05);PHYH基因在二代羊各部位表达量均低于巴什拜羊;STAT3基因在二代羊除背最长肌外的其余部位的表达量高于巴什拜羊,差异不显著(P>0.05);GPAM基因在二代羊各部位的表达均低于巴什拜羊,其中肝脏差异显著(P<0.05);ALDH1A1基因在二代羊瘤胃的表达极显著高于纯种羊(P<0.01)。
结论:SCD、ESR1、EMR1、PHYH基因在尾脂中的表达量有显著或极显著差异,可能是直接影响尾脂沉积的关键性候选基因,其中:SCD、ESR1、EMR1基因负向调控尾脂沉积,PHYH基因正向调控尾脂沉积。STAT3、ALDH1A1基因负调控脂肪沉积,GPAM正向调控脂肪沉积,从而间接影响了尾脂沉积。
研究主要结果如下:
1、杂交二代群体脂尾的形态分化研究
二代群体的脂尾出现了分化,共有小尾型、中尾型、大尾型和肥尾型4个类型,平均体积分别为312cm3,953.6cm3,1764.2cm3,2046cm3。肥尾型羊体长指数极显著大于小尾型(P<0.01);大尾型羊的体躯指数极显著大于小尾型(P<0.01);大尾型、肥尾型羊的胸围指数、胸指数极显著大于小尾型(P<0.01)。表明随着尾脂的分化,体型结构也发生了显著或极显著的变化。
2、不同群体的脂肪细胞形态学差异
平均直径、面积:巴什拜羊的尾脂、皮下脂细胞极显著大于二代羊(P<0.01);巴什拜羊的皮下脂细胞大于尾脂细胞,差异不显著(P>0.05),二代羊皮下脂细胞极显著大于尾脂细胞(P<0.01)。尾脂面密度:巴什拜羊极显著大于杂交二代羊(P<0.01);皮下脂面密度:杂交二代羊极显著大于巴什拜羊(P<0.01);巴什拜羊皮下脂显著高于尾脂(P<0.05),杂交二代羊的皮下脂极显著高于尾脂(P<0.01)。
3、转录组数据差异表达基因分析
按照p≤0.05且表达差异倍数|log2FC|≥1的标准进行筛选,共得到873个差异表达基因(DEGs),其中上调基因590个,下调基因283个。进一步进行GO及KEGG分析,选择与脂肪代谢相关的通路及基因,从中筛选出7个关键基因。
4、对7个差异表达基因进行组织表达验证
分别对两群体的11个部位的组织进行定量分析。群体内部位间分析:SCD基因在巴什拜羊肝脏中表达最高(P<0.01),在二代羊皮下脂表达最高(P<0.01);ESR1、EMR1、GPAM基因在背最长肌的表达最高(P<0.01);PHYH基因在肝脏表达最高(P<0.01);STAT3基因在背最长肌、股四头肌表达最高(P<0.01);ALDH1A1基因在小肠表达最高(P<0.01)。
群体间同部位表达差异:SCD基因在二代羊尾脂表达极显著低于巴什拜羊(P<0.01);ESR1、EMR1基因在二代羊尾脂的表达显著低于巴什拜羊(P<0.05);PHYH基因在二代羊各部位表达量均低于巴什拜羊;STAT3基因在二代羊除背最长肌外的其余部位的表达量高于巴什拜羊,差异不显著(P>0.05);GPAM基因在二代羊各部位的表达均低于巴什拜羊,其中肝脏差异显著(P<0.05);ALDH1A1基因在二代羊瘤胃的表达极显著高于纯种羊(P<0.01)。
结论:SCD、ESR1、EMR1、PHYH基因在尾脂中的表达量有显著或极显著差异,可能是直接影响尾脂沉积的关键性候选基因,其中:SCD、ESR1、EMR1基因负向调控尾脂沉积,PHYH基因正向调控尾脂沉积。STAT3、ALDH1A1基因负调控脂肪沉积,GPAM正向调控脂肪沉积,从而间接影响了尾脂沉积。