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前言 增食欲素A(orexinA，OXA)和增食欲素B(orexinB)是近年来发现的下丘脑神经肽，通过激活两种G蛋白偶联受体而发挥作用，分别为增食欲素受体1(orexinreceptor1，OX1R)和增食欲素受体2(orexinreceptor2，OX2R)。其中OX1R是首先被发现的，且与orexinA有较高的亲和性。大量的资料显示，orexinA及其受体参与多种生理功能的调节，包括摄食、睡眠-觉醒、生长、生殖、应激、能量代谢平衡及内分泌等。最近的研究表明，orexin系统还参与细胞增殖与凋亡的调控。近来的研究表明，除了中枢神经系统，外周组织也有orexin系统的表达。1999年，有学者发现大鼠胰腺组织有orexinA、OX1R的表达，说明orexinA及其受体OX1R参与胰岛细胞功能的调节。已有多个实验证实orexinA可在体内、体外影响胰岛素的分泌，但结论并不一致，且机制尚不清楚。另外，关于orexinA及其受体OX1R对胰岛β细胞增殖、凋亡的影响研究尚未见报道。 实验方法 体外培养大鼠INS-1细胞，应用实时定量PCR检测胰岛细胞信号转导通路(PI3K/AKT)mRNA的表达情况。Western-blot技术检测胰岛细胞OX1R蛋白磷酸化水平。分别加入不同浓度的orexinA和/或OX1R特异性抑制剂(SB334867)和/或PI3K特异性拮抗剂(wortmannin)和/或AKT特异性拮抗剂(PF-04691502)进行干预，western-blot技术检测细胞OX1R蛋白表达及AKT总蛋白及磷酸化蛋白水平;放免法测定培养液中胰岛素分泌浓度;MTT法检测细胞增殖;凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Caspase-3分光光度法测INS-1细胞caspase-3活性。 实验结果 OXA(10-10M，10-8Mand10-6M)能够升高OX1RmRNA和磷酸化蛋白的水平，且10-8M和10-6M组具有统计学意义(p＜0.05）。当预处理OX1R蛋白特异性抑制剂SB334867后，该作用被抑制。增食欲素能够促进INS-1细胞胰岛素的释放，减少caspase-3的活性。我们用MTT法研究OXA对INS-1增殖的影响，发现10-6MOXA能明显提高细胞增殖及存活率，且给予AKTantagonist(PF-04691502)和/或PI3Kantagonist(wortmannin)和/或OX1Rantagonist(SB334867)后，该作用被抑制。不同浓度OXA均可减少细胞凋亡（P＜0.05），同时通过经特异性抑制剂后处理后，此作用被抑制。同时证明10-6MOXA可以升高INS-1细胞p-AKT的水平，与对照组相比有统计学意义(P＜0.05），但不能升高总的AKT水平。 结论 1、orexinA通过OX1R调节胰岛β细胞分泌胰岛素功能，并促进胰岛β细胞增殖与凋亡。 2、orexinA通过OX1R和AKT信号转导通路参与INS-1细胞分泌胰岛素功能及细胞增殖和凋亡的调节。