【摘 要】
：
目的：构建以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein，GFP)为报告基因的重组表达质粒PcDNA3.1／NT-GFP-S1OOA13，瞬时转染观察其在COS-7细胞中的表达及亚细胞定位；以瞬时转染实验为
论文部分内容阅读
目的：构建以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein，GFP)为报告基因的重组表达质粒PcDNA3.1／NT-GFP-S1OOA13，瞬时转染观察其在COS-7细胞中的表达及亚细胞定位；以瞬时转染实验为基础，转染HepG2细胞筛选获得稳定表达S100A13基因的细胞系，对比研究转染前后HepG2细胞生物学性状的变化及对抗癌药物敏感性的差异。 方法：从甲状腺癌组织中提取总RNA，采用RT-PCR技术扩增S100A13基因的编码区序列，回收PCR产物连接入克隆载体(pGEM-T载体)。扩增，质粒提取，酶切并测序鉴定。设计带6个组氨酸标签的上游引物，以第一轮克隆质粒为模板，PCR扩增产物亚克隆入PcDNA3.1／NT-GFP-topo vector，并进行测序鉴定。提取测序鉴定后的真核表达载体采用脂质体介导瞬时转染COS-7细胞，荧光显微镜下观察该基因亚细胞定位，RT-PCR验证重组S100A13 mRNA的表达；以转染COS-7细胞实验参数为基础，脂质体介导稳定转染HepG2细胞，G418筛选获得稳定表达重组S100A13基因细胞系，观察该基因在HepG2细胞的定位，RT-PCR和Western-blot验证重组S100A13 mRNA和蛋白的表达。半定量RT-PCR检测稳定转染前后细胞FGF1表达量的变化；MTT法观察转染后细胞的生长曲线；加入化疗药物5-Fu处理后，流式细胞术检测转染前后细胞凋亡率的差异。 结果：酶切和测序结果证实重组质粒含有S100A13编码区序列且插入方向正确，RT-PCR证实了S100A13基因在COS-7细胞中的表达，重组S100A13基因在COS-7细胞中亚细胞定位于全胞浆。 RT-PCR和Western-blot表明重组S100A13基因在HepG2细胞中稳定表达，荧光显微镜下观察绿色荧光均匀分布于整个细胞。半定量RT-PCR表明转染PcDNA3.1／NT-GFP-S100A13组FGF1表达量明显高于阴性对照组及空载体组。但
其他文献
生态环境除了包含经济价值,还具有生态功能和价值,生态环境作为公共物品,被全体公众享有。为了保障公民环境权益,解决日益严峻的生态环境问题,可以通过环境民事公益诉讼这一方式来保护环境公共利益以及生态环境的功能和价值。但是恢复原状、赔偿损失等传统侵权责任因其具有局限性且偏向于救济私人利益,不能全面地解决环境公共利益损害问题。为了能够更好的针对生态环境损害进行救济,便出现了生态环境修复责任。生态环境修复责
船闸工程中的深基坑开挖,高水头作用下的基坑渗透稳定是涉及基坑稳定安全的重要因素,选择合适的防渗技术尤为重要。宝应船闸扩容工程紧邻京杭运河,基坑最大开挖深度16m,基坑
目的:探讨P-选择素(P-selectin)及其配体表达在食管鳞癌发生、发展中的生物学特征和临床意义。 方法:选取86例食管鳞癌组织、相应86例癌旁淋巴结组织与10例正常食管组织标
目的:本课题主要研究Tamoxifen（TAM）联合60Coγ线对脑胶质瘤细胞的抑制作用以及TAM对细胞辐射敏感性的影响;TAM和60Coγ线对胶质瘤细胞的凋亡诱导作用和细胞周期进程的影响;TAM
根据对试验结果的分析和研究,影响石膏砌块墙体性能的关键因素为:石膏砌块墙体的安装,施工工法以及石膏砌块的物理力学性能.该文除简述了石膏砌块墙体的一般特性外,还较系统
未成年人刑事立法有狭义和广义之分，狭义的未成年人刑事立法是指“小刑法”，即既包括未成年人犯罪也包括成人犯罪的法律规范的总称，在此刑法中，未成年犯罪比照成人犯罪从轻、减轻
目的椎体压缩性骨折是临床常见的骨折类型,多发于老年群体,不仅会导致患者受伤椎体疼痛,还诱发椎体远端疼痛,对患者生活质量造成严重影响。本研究分析单侧与双侧入路高黏度骨
我国已经确定将在2017年启动全国统一的碳排放权交易市场,建立完善的碳排放权交易的各项具体制度,同时制定完备的碳排放权交易法律制度为其提供法律层面的保障,使我国的碳排
目的本研究旨在寻找干预老年痴呆患者认知功能的最优认知干预措施;延缓痴呆病程,改善生活质量,提升幸福水平;同时为医疗卫生服务的相关工作者,卫生决策者和护理专员在众多认知干预措施的选择上提供更加科学的参考依据。方法检索中国学术期刊网络出版总库(CNKI)、万方数据期刊论文资源库(WanFang data)、中国生物医学文献网(CBM,Sinomed)、重庆维普中国科技期刊全文数据库(VIP)、PubM
<正> 娘子关泉群出露于山西省娘子关绵河两岸,其多年平均流量为11.7m~3/s,为一大型裂隙岩溶泉。本文采用时间序列叠加模型,探讨泉流量的动态规律与形成因素,并能用泉水流量过