奶牛乳腺炎是在奶牛养殖业中最常见、发病率最高的疾病之一,而大肠杆菌是世界范围内引起奶牛乳腺炎的主要病原菌。随着抗生素的应用,使耐药菌得以选择性地进化,多重耐药菌株的出现导致大肠杆菌的耐药性问题日渐严重,对抗生素产生耐药的大肠杆菌正在成为兽医和公共卫生的潜在威胁。本研究采集苏北地区3个规模化牧场的奶牛临床乳腺炎乳样,进行病原菌流行病学调查,分离鉴定主要病原菌。对大肠杆菌分离株的耐药表型、耐药基因和毒力基因进行了检测,鉴定其系统发育分型,探讨了耐药表型与毒力基因、种系发育分型的相关性。旨在了解苏北地区奶牛乳腺炎感染的优势病原菌,大肠杆菌的耐药性、毒力基因的分布及二者的相互关系,为有效控制苏北地区大肠杆菌性奶牛乳腺炎的流行传播提供实验依据。本研究运用细菌培养和16SrDNA的方法对苏北地区3个规模化牧场的156份临床乳腺炎乳样进行细菌的分离鉴定,结果显示:在采集到的156份奶样中,分离出细菌12种共289株,无菌奶样13份,细菌总检出率为91.67%;其中大肠杆菌的最多,有78株,流行率为26.99%,其次是克雷伯氏菌67株（23.19%）、葡萄球菌38株（13.15%）。采用K-B纸片扩散法对78株分离自苏北牧场奶牛乳腺炎乳样的大肠杆菌进行药物敏感实验,结果显示:对林可霉素、青霉素、阿莫西林和头孢噻吩表现耐药,其中林可霉素的耐药率为66.7%,青霉素的耐药率为60.2%,头孢噻吩的耐药率为57.7%,阿莫西林的耐药率为55.1%;对庆大霉素和四环素最敏感,敏感率达83.3%,其次是链霉素和环丙沙星,分别为73.1%和71.8%。通过PCR检测β-内酰胺类blaTEM、blaCTX-M、blaSHV,氨基糖苷类armA、armB,四环素类tetA、tetB、tetC和喹诺酮类qnrS、qepA、oqxA、oqxB等12种耐药基因。其中所有大肠杆菌都携带blaTEM基因,blaCTX-M 检出率为 53.8%,blaSHV（20.5%）、armA（9.0%）、tetA（26.9%）、tetB（2.6%）、tetC（20.5%）、qnrS（29.5%）、oqxA（37.2%）和 oqxB（1.3%）等 8 种耐药基因检出率较低,未检测到armB和qepA基因。运用PCR扩增技术,对78株大肠杆菌进行系统发育分型和f17A、fimH、papC、sfaD、afaD-8、afaE-8、stx1、stx2、cnf1、cnf2、LT1、STb、hlyA、iucD、colV、ompC、ompF、irp2、fyuA、eaeA、ler和Ecs3703等22种毒力基因的检测。结果显示:A型占37.2%,B1 型占 52.5%,B2 型占 1.3%,D 型占 9.0%。共检出 ompC（98.7%）、fimH（94.9%）、ECs3703（92.3%）、ompF（82.1%）、irp2（32.1%）、fyuA（32.1%）、iucD（24.4%）和f17A（1.3%）等8种毒力基因,其余14种毒力基因未被检测出。这78株大肠杆菌中B1型最多,其携带的毒力基因种类也最多。运用SPSS软件等统计方法对78株大肠杆菌的耐药性与毒力基因进行了相关性分析。结果表明,耐药表型与毒力基因、系统发育分型之间存在不同程度的相关性。