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目的： 本课题在前期研究上，为进一步明确心房利钠肽（atrial natriu-retic peptide,ANP）是否为针刺“宁心安神”抗焦虑的重要靶点，拟采用ANP基因敲除技术，观察针刺对ANP缺失小鼠焦虑行为和HPA（hypothalamic-pituitary-adreno-Cortical axis,HPA）轴的影响，阐明ANP抗焦虑的作用地位，进而为阐释针刺“宁心安神”治疗焦虑障碍的科学内涵提供部分实验依据。 方法： 选用以C57BL/6J为背景品系的野生型ANP(+/+)及ANP基因敲除ANP(-/-)小鼠各30只，依据体重和行为学，采用随机分层分组，分为ANP(+/+)空白组、ANP(+/+)模型组、ANP(+/+)针刺组、ANP(-/-)空白组、ANP(-/-)模型组、ANP(-/-)针刺组，共6组，每组10只。参照文献复制不可预知慢性应激焦虑(chronic unpredictable stress,CUS)模型。运用基因敲除技术，观察针刺对ANP基因缺失焦虑小鼠行为学及HPA轴的影响。取“内关”、“神门”穴，采用斜刺的方法，每5min捻转行针1次,每次行针30s,频率60转/min，治疗30min，左右交替，隔日一次，共治疗8次，持续15天。采用高架十字迷宫（elevated plus maze test，EPM）测试各组小鼠焦虑水平，免疫组化法检测小鼠下丘脑室旁核（paraventr-icular nucleus of hypothalamus,PVN）ANP、NPR-A、促肾上腺皮质激素释放激素（cortico-tropin-releasing hormone，CRH）表达，酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay，Elisa）检测小鼠血浆CRH、促肾上腺皮质激（adreno-cortico-tropic-hormone,ACTH）、皮质酮(cortico-sterone，CORT）的含量。 结果： 1、行为学测试结果：（1）OT％值：ANP(+/+)模型组OT％值较ANP(+/+)空白组显著下降(P<0.01)；与ANP(+/+)模型组相比，ANP(+/+)针刺组OT％值明显升高(P<0.05)。ANP基因缺失后，与ANP(+/+)空白组相比，ANP(-/-)空白组、ANP(-/-)模型组OT％值均显著减少(P<0.01)；与ANP(+/+)针刺组相比，ANP(-/-)针刺组OT％值明显下降(P<0.05)；三组ANP(-/-)组间无明显差异(P>0.05)。 2、下丘脑ANP、NPR-A检测结果：（1）ANP：焦虑模型小鼠下丘脑ANP表达较ANP(+/+)空白组明显减少（P<0.05）；与ANP(+/+)模型组比，针刺能明显提高下丘脑ANP表达（P<0.01）。（2）NPR-A：ANP(+/+)模型组下丘脑NPR-A平均光密度值较ANP(+/+)空白组显著降低（P<0.01）；与ANP(+/+)模型组相比，ANP(+/+)针刺组小鼠下丘脑NPR-A表达显著增多（P<0.01）。敲除ANP基因后，ANP(-/-)空白组、ANP(-/-)针刺组下丘脑NPR-A含量较ANP(+/+)模型组明显增多（P<0.05）；三组间纯合子鼠下丘脑NPR-A表达无显著差异（P>0.05）。 3、HPA轴的相关指标：（1）下丘脑PVN的CRH：ANP(+/+)模型组下丘脑CRH平均光密度值较ANP(+/+)空白组显著增高（P<0.01）；ANP(+/+)针刺组CRH表达较ANP(+/+)模型组显著减少（P<0.01）。敲除ANP基因后，与ANP(+/+)空白组相比，ANP(-/-)空白组、ANP(-/-)模型组下丘脑CRH表达显著增多（均P<0.01）；与ANP(+/+)针刺组相比，ANP(-/-)针刺组CRH光密度值显著增高（P<0.01）。三组纯合子小鼠组间比较无显著差异（P>0.05）。（2）血浆CORT：与ANP(+/+)空白组比，ANP(+/+)模型组血浆CORT呈显著增高（P<0.01）；与ANP(+/+)模型组相比，ANP(+/+)针刺组血浆CORT含量显著减少（P<0.01）。ANP基因敲除后，与ANP(+/+)空白组相比，ANP(-/-)空白组血浆CORT水平明显增高（P<0.05），ANP(-/-)模型组血浆CORT显著增高（P<0.01）；与ANP(+/+)针刺组比，ANP(-/-)针刺组血浆CORT含量明显增多（P<0.05）。ANP基因敲除小鼠三组间血浆CORT水平无显著差异（P>0.05）。 结论： 1、针刺“宁心安神”对慢性应激焦虑模型小鼠具良好抗焦虑效应，这可能与其调节ANP-HPA轴的相关信息分子有关；ANP-HPA轴可能为针刺“宁心安神”抗焦虑的重要通路之一。 2、ANP基因敲除可抑制针刺的抗焦虑效应，同时阻断针刺调节HPA轴的作用，进一步证实ANP在针刺“宁心安神”抗焦虑作用中占有十分重要的地位。