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维生素B6（VB6）是一类吡啶化合物的总称,为无色晶体,易溶于水和乙醇,是人体必需的维生素。PLP（磷酸吡哆醛）是其主要活性形式,是生物体代谢过程中多种酶的辅酶,研究显示PLP不仅与氨基酸的代谢有密切相关,其还可参与调节细胞信号转导过程。自然界中VB6的从头合成途径分为两条,一条为DXP依赖途径,该途径仅存在于真核细菌中;另一条为DXP非依赖途径,是自然界中VB6合成的主要途径。VB6的六种组份可通过代谢转换途径实现相互转换,其中PL激酶、PL还原酶、PNP氧化酶、吡哆胺丙酮酸转氨酶及磷酸酶在此过程中发挥重要作用。动物自身不能从头合成VB6,只能通过VB6的代谢转换将从饮食中摄取的VB6转换成机体所需要的形式。植物作为动物获取VB6的主要来源,研究其体内VB6的代谢转换具有重要意义。本文以模式植物烟草为材料对PNPO（PNP氧化酶）及PA-O（多胺氧化酶）进行了相关研究。1、通过对已知的NtPNPO氨基酸序列的分析,克隆得到去除叶绿体转运肽同源域的NtPNPO序列,称NtPNPO-2;同时去除叶绿体转运肽同源域、Yjef-N功能域同源域的NtPNPO序列,称NtPNPO-3,测序结果显示NtPNPO-2编码框全长1296bp,编码含有431个氨基酸残基的蛋白质,分子质量为48KDa,等电点为6.31;NtPNPO-3编码框全长750bp,编码含有249个氨基酸残基的蛋白质,分子质量为28KDa,等电点为7.49。通过构建Pmal-C2x-NtPNPO-2、Pmal-C2x-NtPNPO-3原核表达载体,成功获得融合蛋白,随后酶活测定结果显示NtPNPO-2、NtPNPO-3均有催化PMP（磷酸吡哆胺）的活性,明确了烟草PNP氧化酶中Yjef-N功能域并非该酶发挥活性的必要结构。2、通过对烟草EST库的比对得到多胺氧化酶cDNA序列（称NtPAO）,对NtPA O进行克隆得到预期的DNA片段,测序结果显示NtPAO编码框长度为1707bp,编码含有568个氨基酸残基的蛋白质,该蛋白的分子量约为63KDa,等电点为5.35。通过构建P-mal-C2x-NtPAO原核表达载体,成功获得目的蛋白。以Spm（精胺）为底物的酶促反应显示,粗酶液具有多胺氧化酶活性,表明原核表达产物是具有活性的N tPAO蛋白。随后以PM（吡哆胺）为底物的酶促反应,显示NtPAO具有催化PM的功能。