羧酸酯酶（CES）能有效催化羧酸酯类、酰胺类、硫酯类等内源性和外源性物质的水解,该酶在前药的代谢中发挥着重要作用。依那普利作为一种前药自身无活性,口服后主要经肝脏CES1代谢,生成活性代谢物依那普利拉,随后主要经肾上的OAT3介导随尿排出。课题组前期在体外试验中已筛选出部分黄酮类化合物对hOAT3具有较强的抑制作用,但所选黄酮与依那普利拉在大鼠体内rOat3无明显作用。为进一步探究其原因,本研究首先从rOat3介导的依那普利拉排泄着手,探究所选黄酮化合物对依那普利拉体内药代动力学的影响。并由此向上游即CES1介导的依那普利代谢进行探究,主要探究黄酮类化合物对CES1活性的影响,同时考察了在过氧化状态下黄酮类化合物对CES1活性的保护作用。本课题首先优化了依那普利拉LC-MS/MS检测方法并进行方法学验证。根据血浆蛋白结合率实验及大鼠肝微粒体代谢稳定性实验结果挑选黄酮类化合物进行后续实验。最终选取了血浆蛋白结合率高、代谢较快的木犀草素和血浆蛋白结合率低、代谢相对较慢的大豆苷元。二者进行体外摄取实验及大鼠体内药动学实验。体外实验获得所选黄酮对rOat3抑制的IC50值。体内研究考察木犀草素和大豆苷元与依那普利拉在大鼠体内的相互作用。体内结果表明,木犀草素对rOat3有明显抑制作用,大豆苷元则没有。两组血中依那普利拉的暴露量与对照组比均无明显变化。推测原因为:1)黄酮类化合物在大鼠体内不稳定、代谢过快或者血浆蛋白结合率太高导致游离的药物浓度过低;2)相较于rOat3,可能羧酸酯酶活性对依那普利拉体内暴露量影响更大,而黄酮类化合物对羧酸酯酶活性有影响。基于以上推测,本研究选取31个黄酮类化合物考察其对CES1活性的影响。实验筛选出在低浓度下对CES1有激动和抑制作用的黄酮类化合物,并选择了激动效果最好的表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）进行体内实验。结果表明,EGCG对CES1的激动作用在体内得以验证:依那普利拉的AUC0-t值、Cmax值均约为对照组的1.3倍。此结果与体外EGCG对羧酸酯酶的激动效果相符。同时挑选CES1的其他底物（氯吡格雷和奥司他韦）来验证黄酮类化合物对CES1的作用与上述是否相同,结果显示黄酮类化合物对CES1的抑制或激动作用存在底物依赖现象。羧酸酯酶活性受多重因素影响,除前面筛选出的激动剂和抑制剂外,过氧化也可使药物代谢酶活性下降。而黄酮类化合物因其良好的抗氧化作用被广泛应用于各种护肤品、营养保健品中。因此,本研究继续考察黄酮类化合物在羧酸酯酶氧化损伤过程中的作用。首先对实验体系的蛋白浓度及孵育时间进行了优化,接着考察部分黄酮类化合物在H2O2致羧酸酯酶氧化损伤过程中的作用。实验结果表明,在规定浓度下儿茶素类化合物对羧酸酯酶均有保护作用而其他黄酮类化合物则表现出明显的抑制作用。进一步研究显示花生四烯酸（多不饱和脂肪酸）、FeC13及氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对CES1活性均有抑制作用,EGCG和EGC在此过程中均有不同程度的保护作用。同时使用THP-1细胞裂解液体系进行了验证。结果显示,EGCG和EGC在不同浓度下,对H2O2所致酶损伤的体系中发挥不同的作用。即高浓度下（100 μM）加剧酶损伤效果,低浓度下（10 μM）则对酶有保护作用。由于该体系下抗氧化因素（超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽等）较多,THP-1细胞裂解液体系中H2O2致酶损伤效果与大鼠肝S9相比效果不明显。综上,CES1介导的药物代谢是草药-药物相互作用潜在且重要的机制,可能会影响一些常见的处方药物与草药联合使用的有效性和安全性。鉴于药物代谢转运机制多样且复杂,患有慢性疾病（高脂血症、高血压等）人群服用处方药,如同时长期使用营养保健品、植物提取物、中草药等,应重点关注处方药物的安全性和有效性。