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目的作为Epstein-Barr病毒(EBV)高度相关的恶性肿瘤,鼻咽癌微环境中存在大量浸润性淋巴细胞及PD-L1高表达。通常认为,PD-L1高表达伴大量CD8~+T细胞浸润的实体瘤患者对PD-1/PD-L1抑制剂具有更好的应答。但现有临床数据表明,PD-1抑制剂在晚期NPC的客观缓解率仅20%~30%。有研究发现,PD-L1的最强诱导因子——IFN-γ,可以下调肿瘤细胞表面活化性蛋白NKG2D配体(NKG2DLs)的表达。由于其特异性受体NKG2D为NK细胞、CD8~+T细胞表面的活化性蛋白,可同时调节固有免疫及特异性免疫应答。因此,肿瘤细胞表面NKG2DLs的下调可能导致免疫逃逸甚至免疫耐药的产生。本研究旨在阐明NPC中IFN-γ对PD-L1及NKG2DLs的表达调控作用,并对其调控机制及该现象在PD-1/PD-L1抑制剂原发耐药中的作用进行初步探讨。方法1、获取癌症基因组图谱据库、基因表达综合数据库中头颈部鳞癌及鼻咽癌的RNA测序数据,分析IFN-γ与PD-L1、NKG2DLs之间的mRNA表达相关性,筛选出相关性最强的NKG2DLs分子;2、对本中心临床样本库的鼻咽癌标本进行免疫组化染色,在组织水平上评估CD8、PD-L1及ULBP3蛋白的表达相关性与临床特征相关性;3、利用外源性IFN-γ干预NPC细胞株,通过流式细胞检测、Western-blot及qPCR,在细胞水平验证IFN-γ对PD-L1及NKG2DLs的调控作用。结果1、在头颈部鳞癌及鼻咽癌组织中,IFN-γ与PD-L1的mRNA表达水平显著正相关(头颈部鳞癌:R=0.65,P<0.001;鼻咽癌:R=0.35,P<0.001),同时与ULBP3的mRNA表达水平显著负相关(头颈部鳞癌:R=-0.176,P<0.001;鼻咽癌:R=-0.3,P=0.001)。2、鼻咽癌组织中,PD-L1主要分布于肿瘤细胞膜表面,呈环状或线状染色,少量散在表达于间质免疫细胞胞质中;ULBP3多呈胞质分布,主要分布于间质淋巴细胞中。PD-L1膜蛋白表达与CD8~+T细胞浸润程度显著正相关,同时与ULBP3膜蛋白表达显著负相关。3、CNE-1、CNE-2、5-8F鼻咽癌细胞系中,体外IFN-γ可以诱导PD-L1 mRNA及蛋白显著上调,同时可诱导ULBP3 mRNA及蛋白显著下调。4、在接受标准治疗的III~IVA期鼻咽癌患者中,ULBP3高表达者的OS及DFS较阴性或低表达者均显著延长(OS:P=0.033;DFS:P=0.036)。在一例PD-1抑制剂原发耐药患者的免疫微环境中,发现大量CD8~+T细胞浸润伴PD-L1强表达,同时ULBP3表达阴性;另一例PD-1抑制剂客观响应患者的肿瘤微环境中,则为CD8~+T细胞浸润伴PD-L1表达,同时ULBP3表达阳性。结论1、IFN-γ可同时诱导PD-L1蛋白及mRNA表达上调以及UBLP3蛋白及mRNA表达下调,呈显著时间-效应关系。这两个分子事件可能存在相同的信号通路途径,或为IFN-γ介导的JAKs/STATs通路,仍需进一步实验验证。2、ULBP3蛋白膜表达水平是接受标准治疗的III~IVA期鼻咽癌患者的预后影响因子。3、膜型UBLP3蛋白表达缺失可能是部分鼻咽癌患者对PD-1抑制剂原发耐药的独特机制,PD-L1阳性/ULBP3低表达亚群可能是免疫逃逸的独特亚群。纳入ULBP3的鼻咽癌免疫微环境分型或可更精确地划分出PD-1抑制剂敏感人群,指导PD-1抑制剂的临床应用及疗效监测。