论文部分内容阅读
目的:研究人参皂苷Rd对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用，并探讨其作用机制，为开发治疗心脑血管疾病药物提供理论依据。 方法:培养HUVEC，实验分为7组:空白对照组，溶媒对照组，缺氧损伤组（模型组），人参皂苷Rd不同浓度组(25μ mol/L、125μ mol/L、625μ mol/L)，阳性药组(Nimodipine50μmol/L)，药物干预24h后，除空白对照组和溶媒对照组外，其余组用8mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导HUVEC损伤4小时，进行相关指标检测:1.倒置显微镜下观察细胞形态学。2.线粒体琥珀酸脱氢酶(MTT)法检测细胞存活率。3.光化学法检测培养液LDH外漏浓度。4.硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)活力。5.流式细胞术测定细胞内游离钙([Ca2+]i)浓度。6.AO/EB双染法检测细胞凋亡和死亡。7.免疫细胞化学法测定细胞色素C含量。8.Realtime-PCR测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax mRNA的表达。 结果:8 mmol/L的Na2S2O4损伤4小时可明显降低HUVEC的增殖活性，增加LDH的外漏，增高细胞内[Ca2+]i水平，提高MDA含量，降低SOD活性，增加细胞色素C的释放，引起细胞凋亡，增高Bax mRNA表达量及降低Bcl-2 mRNA表达量，且与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.01)，表明HUVEC缺氧损伤模型复制成功;不同浓度的人参皂苷Rd可提高HUVEC的MTT吸光度值，减少LDH的外漏，降低细胞内[Ca2+]i水平，MDA产生减少，SOD活性增强，减少细胞色素C的释放，降低Bax mRNA、增高Bcl-2mRNA表达量，抑制细胞凋亡，与模型组比较差异有显著性差异(p＜0.01或p＜0.05)。 结论:人参皂苷Rd对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞具有保护作用，能提高内皮细胞的存活率及改善其形态，其作用机制可能包括:(1)降低细胞内[Ca2+]i水平，(2)增强清除自由基的能力，提高抗脂质过氧化能力，(3)保护细胞线粒体，减少细胞色素C的释放，降低Bax mRNA的表达，提高Bcl-2 mRNA的表达，干预线粒体凋亡信号转导途径从而抑制细胞凋亡。