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背景:阿尔茨海默病(Alzheimer’ s Disease,AD)是由错综复杂的病因引起中枢神经系统进行性退化的疾病,其发病机制目前尚不完全清楚。发病率随年龄而增加,女性多于男性,给患者的生活质量带来重大的影响,可因并发症而死亡。中医药相关研究因其多途径、多靶点的治疗机制正成为研究热点。当归芍药散(DSS)广泛应用于临床各科疾病,传统上主要用于治疗妇科疾病,而在治疗神经系统性疾病方面也有大量的临床及实验研究。本研究基于DSS的功能主治及现代药理学研究成果,探讨了该方治疗AD的潜在作用靶点。目的:探讨DSS对去卵巢(OVX)小鼠外周脂质代谢紊乱及认知功能的调节作用,并通过测定海马中炎症细胞及NLRP3小体及其相关因子、雌激素受体(ERs)的表达变化,为研究DSS治疗AD的途径和作用靶点提供参考。方法:DSS对OVX小鼠脂质代谢的影响小鼠分为正常组(CON)、模型组(MOD)、阳性对照药组(E2)、DSS-低剂量(DSS-L)组及DSS-高剂量组(DSS-H),除CON组外,其余小鼠双侧摘除卵巢。E2的给药剂量为100 μ g/kg/d,采用腹腔注射法;DSS-L及DSS-H给药剂量分别为3.2g/kg/d、6.4g/kg/d,采用灌胃给药;CON与MOD给予等量的蒸馏水灌胃,给药时间为12周。给药期间,小鼠每周称量体重1次,观察小鼠体重的变化。小鼠行为学测试后取材,取小鼠完整子宫,测定子宫指数;取血清,用ELISA试剂盒测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量。当归芍药散对OVX小鼠认知功能的影响持续给药12周后,各组小鼠进行行为学测试,采用Morris水迷宫测试、Y迷宫和旷场实验考察DSS对小鼠认知功能的影响。采用免疫组化染色法观察小鼠脑组织中海马小胶质细胞标志物Iba1的表达及星形胶质细胞标记物GFAP蛋白的表达;此外,用ELISA测量海马炎症因子IL1-β的表达;最后用 Western blot 法检测海马中 NF κB,NLRP3,ASC,caspasel,IL1-β,及ERα和ERβ蛋白的表达。以上实验数据均采用SPSS 17.0软件处理,用Mean±SE表示。结果:DSS对OVX小鼠脂质代谢的影响与CON组小鼠相比,MOD组体重明显增多(P<0.01),而E2组、DSS-L组与DSS-H组与MOD组相比,都显著抑制了体重的增长(P<0.01);CON组的子宫血管丰富,颜色鲜红,体积较大;MOD组颜色苍白,呈细线状,子宫指数显著降低(P<0.01),E2组与MOD组相比,子宫指数显著增加(P<0.01),DSS-Low组、DSS-H组形态似MOD组,子宫指数差异没有统计学意义(P>0.05)。与CON组相比,MOD组血清TC、TG、HDL-水平显著升高(P<0.05或P<0.01),与MOD组相比,E2组、DSS-L组和DSS-H组显著改善了血脂TC、TG的水平(P<0.01或P<0.05);CON组与MOD组的血清LDL-C水平差异没有统计学意义(P>0.05)。DSS对0VX小鼠认知功能的影响Morris水迷宫测试结果提示,与CON组相比,MOD组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.01),E2 组、DSS-Low 组、DSS-H 组比 MOD 组明显缩短(P<0.01);与 CON 组相比,MOD组的穿越平台次数明显降低(P<0.01),E2组、DSS-L组、DSS-H组比MOD组明显增加(P<0.01);与CON组相比,MOD组的平台所在象限游泳时间明显缩短(P<0.01),而 E2 组、DSS-L1 组、DSS-H1 组比 MOD 组明显延长(P<0.05 或P<0.1);Y迷宫实验结果提示,与CON组相比,MOD组小鼠的进臂正确率显著减少(P<0.01),E2组、DSS-L组、DSS-H组与MOD组相比均增加(P<0.05或P<0.1);旷场试验结果提示,与CON组相比,MOD组的中央区域活动时间百分比著减少(P<0.01),E2组、DSS-L组、DSS-H组与MOD组相比均增加(P<0.05或P<0.1)。DSS对OVX小鼠中枢炎症的影响免疫组化IBal阳性细胞染色结果提示,CON组海马CA3区的IBal阳性细胞胞体较小,突起细长,呈分支状,胞浆呈棕褐色。MOD组IBal阳性细胞染色加深,胞体增大,突起增多,突起变短,形态多样,呈“阿米巴样”。E2组、DSS-Low组和DSS-High组IBal阳性小胶质细胞胞体变小,突起较为细长。与CON组比较,MOD组及IBA1阳性细胞数明显增加,与MOD组比较,E2组、DSS-L组和DSS-H组IBal阳性细胞数明显减少。CON组可见GFAP表达阳性的星形胶质细胞,无反应性增生肥大,胞体较小,分支少而细短,细胞核较小,轮廓清晰,分布规律;MOD组GFAP表达阳性细胞胞体肿胀,突起增多并延长,胞核较大,胞核固缩,突起折断;E2组、DSS-L组和DSS-H组GFAP阳性细胞表达胞体肿胀较轻、突起增多并延长,胞核较大。与CON组比较,MOD组及GFAP阳性细胞数明显增加;与MOD组比较,E2组、DSS-L组和DSS-H组阳性细胞数明显减少。与CON组相比,MOD组IL1-β水平显著增加(P<0.01);与MOD组相比,E2 组、DSS-Low 和 DSS-High 较 MOD 组 IL1-β水平显著降低(P<0.01)。DSS抑制OVX小鼠中枢炎症通路的探究Western-blot结果显示,与CON组相比较,OVX小鼠海马中p-NF κB及NF κB,NLRP3,ASC,pro-caspasel及caspasel,pro-IL1-β及IL1-β蛋白均增加(P<0.01),ER a及ERβ蛋白减少(P<0.01);给予E2或DSS治疗后,NLRP3小体信号通路的相关蛋白在海马中的表达减少(P<0.01或P<0.05);ER a及ERβ的蛋白表达量均增加(P<0.01 或P<0.05)。结论:上述结果表明,长期雌激素剥夺的小鼠会引起脂质代谢异常,体重增加;行为学测试结果表明OVX小鼠认知功能受损,而E2和DSS对认知功能有保护作用;免疫组化、免疫荧光及ELISA检测ILI β结果表明,DSS可以抑制OVX小鼠海马炎症,提示DSS发挥神经保护作用可能是通过抗炎作用实现的;Western-blot检测p-NF κB及NF κB,NLRP3,ASC,pro-caspase1 及 caspase1,pro-IL1-β 及 IL1-β,ER α 及ER β结果提示,DSS抗炎作用可能是通过抑制NLRP3炎症小体通路并由ERs受体介导实现。