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色谱饼是在计量置换理论和短柱原理的基础上设计制造的。现已成功地应用于基因工程下游产品的分离纯化中。本文将其用于动物组织中活性蛋白与工业粗酶的提取,并在较短时间内得到了纯度较高的目的蛋白,体现出色谱饼在分离过程中使用压力低,蛋白回收率高和快速的特点。本文包括五章。 第一章 文献综述 第二章 人血清白蛋白的纯化 在所选定色谱条件下用色谱饼(10×20minI.D.)对其流动相种类、浓度、缓冲液、pH值、流速进行了优化研究,在优化条件下对标准蛋白混合物进行了在不同流速条件下分离情况的比较,结果显示装填有小颗粒填料的色谱饼在高流速条件下仍然具有良好的分离能力,还在较大流速条件下,在10分钟内对人血清白蛋白进行了快速纯化,其纯化的人血清白蛋白的纯度大于88%,蛋白质回收率大与65% 第三章 蛋清中溶菌酶的纯化 首先采用疏水色谱对溶菌酶进行分离纯化,由于蛋清中多种蛋白质与溶菌酶保留时间相近,无法用HIC将其彻底分离。最后采用离子交换色谱纯化溶菌酶,建立了用高效液相色谱分离溶菌酶的新方法,结果表明,被纯化的溶菌酶可以与杂蛋白进行很好的分离,并且得到活性回收率为94%,活性为该方法具有分离速度快,纯化效率高的特点。 第四章 α-淀粉酶的纯化 本章采用高效疏水色谱分离纯化α-淀粉酶,详细讨论了纯化的最佳条件,在给定的条件下纯化工业用α-淀粉酶,其活性回收率达90%,比活性为120U/mg,此法纯化α-淀粉酶简单快速,效率高,不仅可以纯化工业粗酶,也可纯化其他来源的淀粉酶。 第五章 细胞色素C的纯化 本章分别采用高效疏水色谱和高效离子交换色谱分离纯化猪心中的细胞色素C,由于亲水性较强,可以与猪心中其他杂蛋白进行有效分离,得到纯度为90%的目标蛋白,其等电点为10.8,可以很好地在阳离子交换柱中保留,在优化了分离条件的情况下,得到纯度为85%的细胞色素C。