马传染性贫血病毒(Equine Infectious Anemia Virus, EIAV)是一种非灵长类慢病毒,而且是基因组结构最简单的慢病毒,可以将前病毒基因组持久地整合到感染细胞的染色体上并在感染细胞和子代细胞中表达病毒基因,可作为将外源基因引入细胞的载体。本研究的目的在于利用我国在马传染性贫血病毒(EIAV)研究上的成果,在EIAV感染性克隆(pLGFD3-8和pOK8266T)的基础上,构建EIAV包装盒表达载体,选择EIAV基因转移载体的最佳表达条件,完成有效的EIAV基因转移载体四质粒系统构建,获得具有感染性的复制缺陷型伪型EIAV病毒。本实验利用反向遗传操作技术,以EIAV感染性克隆质粒(pLGFD3-8和pOK8266T)为基础,将EIAV gag/pol基因片段和rev基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,成功构建了EIAV包装盒表达载体,即囊膜缺失的EIAV gag/pol表达质粒pCDFGP和rev表达质粒pCDREV;优选了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG作为EIAV基因转移载体四质粒系统中的基因转移载体,确定了载体系统质粒共转染所用方法为脂质体转染法;完成了EIAV基因转移载体四质粒系统的有效构建,即包括EIAV基因转移载体质粒、EIAV包装盒表达载体gag/pol表达质粒与rev表达质粒、以及VSV-G表达质粒的四质粒基因转移载体系统。通过对EIAV基因转移载体系统的四质粒共转染,获得了具有感染性的复制缺陷型伪型EIAV病毒。该伪型病毒能够有效转导HEK293细胞系和NIH 3T3细胞系,完成转基因过程,表达报告基因。但获得的伪型病毒滴度较低,转导效率不高。本研究成果将为中国EIAV基因转移载体四质粒系统的构建提供理论基础和技术支持,为获得高滴度的EIAV伪型病毒奠定基础,也将为人类的基因治疗、转基因动物的制备及结合RNAi技术研究基因功能提供一个新的方法,同时也为理解慢病毒自身及其致病机制和基因表达调控的理论提供依据,为基因治疗、疫苗开发等提供一个新的研究手段。