鹅ERα/β基因克隆及在肝细胞脂肪合成与转运中的功能初探

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哺乳动物脂肪合成与转运异常将会导致甘油三酯在肝脏内过量堆积,使得肝脏发生脂肪变性,从而使肝脏发生病理变化,雌二醇能够通过其受体(ERα/β)的介导调节肝脏脂肪的合成与转运过程。然而,鹅肝脏脂肪变性却不会引起病理变化,且ERα/β对鹅肝细胞的脂肪合成与转运作用还未见报道。本试验通过基因克隆获得鹅ERα/β基因CDS区序列;利用qPCR检测ERα/β的组织特异性以及在鹅肝脏中的发育性表达;并在细胞水平添加雌二醇处理正常和诱导变性后的鹅肝细胞,检测ERα/β及脂肪合成与转运相关基因的mRNA变化情况,初步探索ERα/β在鹅肝脏脂肪合成与转运中的作用。主要研究结果如下:(1)鹅ERα基因部分CDS区序列1755bp,编码585个氨基酸,ERβ基因全长CDS区序列1704bp,共编码568个氨基酸。同源性及进化树结果显示,鹅ERα/β基因与鸟类同源性最高,与鸟类进化关系最近。(2)在不同组织中,ERα主要在垂体、肝脏和卵巢中高表达,ERβ主要在肾脏和肝脏中高表达。(3)在1-6周龄鹅肝脏中,ERα在1-3周龄表达量有下降趋势(p>0.05),4-6周龄表达迅速上升(p<0.05),而ERβ在1-6周龄变化不显著(p>0.05)。(4)正常鹅肝细胞中,雌二醇能够促进ERα基因和脂肪转运相关基因apoB、MTTP、FOXO1 mRNAs的表达(p<0.05),其中apoB与ERαmRNA表达趋势高度一致。而ERβ基因和脂肪合成基因DGAT2 mRNAs的表达仅在高浓度雌二醇下显著高于对照组(p<0.05),二者表达趋势高度一致。另外,雌二醇对DGAT1 mRNA的表达无显著影响。(5)在诱导变性的鹅肝细胞中,雌二醇对ERα/β及脂肪转运相关基因mRNAs的表达趋势与正常肝细胞中类似。但不同的是,在变性细胞中ERα/β及脂肪转运相关基因在相对较低浓度雌二醇下便与对照组呈现显著差异(p<0.05)。综上所述,我们获得了ERα部分CDS区序列和ERβ完整CDS区序列。ERα/β的组织表达模式表明ERα/β在鹅肝脏脂肪合成与转运中具有重要作用,且ERα还参与鹅肝脏的脂肪合成与转运过程。在细胞水平上,ERα、ERβ则分别参与调控鹅肝细胞脂肪的转运及合成的过程。
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