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目的:研究乙型肝炎(乙肝)后肝硬化疾病、证候、疗效与CYP450、IL-10、TNFα、TGF-β基因SNPs的相关性。将病、证、效与基因多态性结合,探索疾病易感性、证候与基因型的相关性、中药扶正化瘀片疗效个体差异的作用机制。
方法:本研究共使用了三种基因型检测方法,包括聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、SNPshot技术平台、聚合酶链反应-连接酶法(PCR-LDR)进行了以下检测:
1、对180例乙肝后肝硬化患者和120例健康对照进行CYP450、IL-10、TNFα、TGF-β、ABCB1等基因的共计31个位点进行SNPs检测,筛选出9个位点进行分析;
2、扩大乙肝后肝硬化患者样本量至343例,并选取106例慢性乙型肝炎患者进行对照,结合120例健康人位点信息,进行9个基因位点的SNPs检测分析;
3、采集343例乙肝后肝硬化患者的中医证候信息,与9个基因位点的SNPs进行相关性分析;
4、将中药扶正化瘀片干预后的123例乙肝后肝硬化患者进行疗效评定,分析疗效与9个基因SNPs的相关性。
结果:
1、多基因位点的筛选:180例乙肝后肝硬化患者和120例健康对照的31个基因位点的检测结果筛选出9个位点CYP1A2-5347、CYP1A2-2964、CYP1A2-733、CYP2C19-681、IL-10-592、IL-10-819、IL-10-1082、TNF-α-308、TGF-β1-509。其中CYP1A2-5347、IL-10-819、IL-10-1082、TNF-α-308、TGF-B1-509位点的基因型和等位基因频率比较均存在统计学意义(P<0.05)。
2、基因与疾病的相关性:1)343例乙肝后肝硬化与120例健康对照的9个位点检测结果显示:CYP1A2-5347、CYP1A2-2964、IL-10-819、IL-10-1082、TNF-α-308、TGF-β1-509位点的基因型和等位基因频率比较均存在统计学意义(P<0.05);2)343例乙肝后肝硬化与106例慢性乙型肝炎的9个位点检测结果显示:CYP1A2-5347、TNF-α-308位点的基因型和等位基因频率比较均存在统计学意义(P<0.05)。
3、基因与中医证候的相关性:1)343例乙肝后肝硬化患者的9个基因位点与6种中医证型的统计分析显示没有统计学差异(P>0.05)。2)将6种中医证型分类为实证、虚证、虚实夹杂证,三类证候的基因位点比较,IL-10-819位点虚证P=0.031,具有统计学意义。3)将年龄、性别、症状体征和证候信息纳入logistic回归分析,结果显示:与CYP1A2-5347位点相关的因素有乏力、纳差、蜘蛛痣、CYP1A2-2964、CYP1A2-733;与CYP1A2-2964位点相关的因素有CYP1A2-5347、CYP1A2-C733A;与CYP1A2-733位点相关的因素有蜘蛛痣、CYP1A2-5347、CYP1A2-2964;与CYP2C19-681位点相关的因素是膝软;与IL-10-592位点相关的因素是膝软、AST、IL-10-1082:与IL-10-819位点相关的因素是中医证型、IL-10-1082;与IL-10-1082位点相关的因素是中医证型、IL-10-592、IL-10-819。4)将年龄、性别、症状体征和基因位点纳入logistic回归分析,结果显示:与实证相关的因素有脘腹胀满、头晕、蜘蛛痣;与虚证相关的因素有两目干涩、畏寒肢冷、IL-10-819、IL-10-1082、TGF-β1-509。
4、基因与中药扶正化瘀片疗效的相关性:将中药扶正化瘀片干预的111例乙肝后肝硬化患者进行治疗6个月前后的中医疗效评定,并与各基因位点进行分析,结果显示中药疗效与CYP1A2-2964位点有相关性(P=0.005)。
结论:通过对CYP450、IL-10、TNF-α、TGF-β基因SNPs与乙肝后肝硬化“病-证-效”的关联研究,得出如下结论:
1、CYP1A2-5347、TNF-α-308位点发生基因变异的个体可能更易发生乙肝后肝硬化这一疾病.CYP1A2-2964、IL-10-819、IL-10-1082、TGF-β1-509位点可能与乙肝肝硬化疾病易感性相关。
2、乙肝后肝硬化中医证候的不同特征与9个基因位点分别存在相关性,其中IL-10-819、IL-10-1082、TGF-β1-509位点与虚证相关性较强。
3、乙肝后肝硬化的中药疗效与CYP1A2-2964位点有相关性。