【摘 要】
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SOX转录因子参与动物生殖过程,其在多个物种中被证实与精子发生有关。然而中华绒螯蟹SOX家族与精子发生的关系却鲜有报道。在本课题中,我们研究了Eriocheir sinensis SOX8在中华绒螯蟹精子发生过程中的功能及其可能的分子机制。免疫荧光结果表明,Es-SOX8主要分布在中华绒螯蟹的精原细胞、精母细胞和圆形精细胞的细胞质和细胞核中,但在成熟精子中未见表达。为研究EsSOX8在精子发生中的
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SOX转录因子参与动物生殖过程,其在多个物种中被证实与精子发生有关。然而中华绒螯蟹SOX家族与精子发生的关系却鲜有报道。在本课题中,我们研究了Eriocheir sinensis SOX8在中华绒螯蟹精子发生过程中的功能及其可能的分子机制。免疫荧光结果表明,Es-SOX8主要分布在中华绒螯蟹的精原细胞、精母细胞和圆形精细胞的细胞质和细胞核中,但在成熟精子中未见表达。为研究EsSOX8在精子发生中的具体功能,我们向中华绒螯蟹注射Es-Sox8的ds RNA进行活体敲降,并对敲降后的中华绒螯蟹精巢组织切片进行H＆E染色观察。结果显示,敲降Es-Sox8后生精小管中的各发育时期的生精细胞出现明显异常,成熟精子被阻滞在生发区不能排出,管腔中成熟精子则缺失。同时我们观察到,生精细胞核形态呈现松散、空洞的状态。此外,成熟精子中异常形态核的比例明显增加。免疫荧光显示核纤层蛋白Lamin在Es-Sox8敲降后的组织中定位紊乱无序,表明精核发育受到影响,说明Es-SOX8很有可能参与中华绒螯蟹精子发生中的精核形变过程。中华绒螯蟹的超微结构观察结果显示,敲降Es-Sox8或Es-BMP2均引起成熟精子的结构异常。我们对Es-SOX8的潜在靶基因Es-BMP2表达进行分析,半定量PCR结果表明该基因的转录水平显著性下调。我们使用双荧光素酶报告基因实验找到Es-BMP2启动子位点。Ch IP实验结果表明,Es-SOX8蛋白结合在Es-BMP2启动子区域。综上所述,Es-SOX8可以直接结合Es-BMP2启动子区域调控其转录,从而影响中华绒螯蟹精子发生过程中核形态构建;Es-BMP2下游蛋白Es-KIFC1的表达水平在Es-Sox8敲降组中的下调,则说明Es-SOX8蛋白对精核形变的调控作用很有可能通过上调Es-KIFC1实现。
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