【摘 要】
:
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶H(EndoH)能够专一性识别并切割寡糖链中N-乙酰葡萄糖胺核心中的β-1,4-糖苷键,从而形成一个N-乙酰葡萄糖胺糖蛋白结构,而且对蛋白质去糖基化并不影响蛋白质的生物学功能。因此,EndoH被广泛应用在糖生物学和糖组学的研究当中。本研究根据GenBank公布的阿维链霉菌Streptomyces avermitilis中EndoH的DNA序列,构建pMA0911.1-en
论文部分内容阅读
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶H(EndoH)能够专一性识别并切割寡糖链中N-乙酰葡萄糖胺核心中的β-1,4-糖苷键,从而形成一个N-乙酰葡萄糖胺糖蛋白结构,而且对蛋白质去糖基化并不影响蛋白质的生物学功能。因此,EndoH被广泛应用在糖生物学和糖组学的研究当中。本研究根据GenBank公布的阿维链霉菌Streptomyces avermitilis中EndoH的DNA序列,构建pMA0911.1-endoH重组表达质粒,转化至枯草芽孢杆菌WB600,通过发酵表达、疏水层析及阴离子交换层析等技术分离纯化后
其他文献
乙偶姻作为重要的平台化合物,广泛应用于医药、食品等行业;其还原产物2,3-丁二醇也是一种重要的化工原料和液体燃料,广泛应用于化工、航空航天等领域。近年来利用微生物发酵法合成乙偶姻和2,3-丁二醇受到越来越多的关注,本研究以符合食品安全要求的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5-5)为研究对象,对其进行代谢工程改造分别合成乙偶姻和2,3-丁二醇,主要研究内容如下:
脯氨酸氨肽酶是一种可特异地从多肽和蛋白质N端水解脯氨酸残基的外肽酶,其与内切蛋白酶复配使用可以增加蛋白质的水解度,在蛋白类食品水解加工产物苦味的去除,特别适合应用于脯氨酸含量较高的蛋白原料水解。选择食品安全菌株Bacillus subtilis对脯氨酸氨肽酶进行外源表达可以大幅度提高其表达水平,降低工业化生产的成本。本研究以连接有脯氨酸氨肽酶cDNA序列的质粒pMD19-pap为模板,设计引物扩增
血栓是导致中老年人心肌梗塞、中风等心脑血管疾病的主要原因之一,血栓疾病已经严重威胁到人类的健康。因此寻找和开发安全可靠、无副作用的溶栓药物具有重要意义。纳豆激酶(Nattokinase,NK,EC 3.4.21.62)因其特有的强溶栓作用被认为是最有潜力的新型溶栓试剂。但产酶量低严重影响了纳豆激酶的生产和应用,因此本文重点研究如何提高纳豆激酶表达量。本论文首先研究了六种不同启动子对纳豆激酶在枯草芽
本论文以一株高产丙酮酸的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)TAM为研究对象,运用代谢工程策略,从构建L-苹果酸的胞质还原路径(rTCA路径)、增强L-苹果酸的外转运、解除C4-二羧酸转运蛋白的泛素化修饰、优化代谢路径的平衡等四个方面调控碳代谢流,从而实现L-苹果酸的高效生产。主要研究结果如下:1.研究了Afpyc、Afmdh、Ropyc和Romdh基因组合表达对酿酒酵母积
酿酒酵母细胞中的RCK2基因编码的蛋白激酶Rck2是高渗甘油途径(HOG)中的蛋白激酶Hog1在细胞质中的作用底物,其被磷酸化而激活,从而应答胞外环境的变化。为了筛选出酵母基因组中调控Rck2表达的基因,本论文将表达质粒pHAC111-RCK2-HA导入酿酒酵母的所有非必需基因缺失株中,利用Western Blot检测融合蛋白Rck2-HA的表达量。最后筛选出13个影响Rck2表达的基因。对这些基
丁醇作为一种新型生物能源,具有能量密度高、腐蚀性低等优点。化石能源危机引起生物质能源的研究热潮,利用微生物发酵的方法来制备丁醇较化学合成法而言,具有环保且操作简便等优点。木质纤维素是最为丰富而廉价的生物质资源,但是不能被产丁醇菌株直接利用;利用酸或碱水解木质纤维素虽然能够产生可被微生物利用的糖类,但同时会产生抑制微生物生长的化学物质,这限制了木质纤维素水解液在丁醇发酵中的应用。本文以筛选获得的丙酮
纤维素酶Cel5A与Cel6A缺乏是限制纤维素酶制剂高效酶解纤维素的关键因素。本文尝试构建高效表达里氏木霉Cel5A与Cel6A的毕赤酵母重组菌株以弥补目前Cel5A与Cel6A天然分泌不足,通过基因密码子偏好性优化、GC含量调整与mRNA二级结构预测等手段优化里氏木霉Cel5A与Cel6A基因,构建表达载体pPIC9K-eg2与pPIC9Kcbh2,将其分别电转化导入毕赤酵母GS115以构建诱导
4-α-糖基转移酶(4-α-glucanotransferase)是一种多功能酶,可以催化环化、歧化、水解和偶合四种反应,其中,它能够通过环化作用使直链淀粉发生分子内转糖基作用制备大元环糊精。大元环糊精(Cycloamylose,CA)是指聚合度在9至几百的环状糊精,具有较大的疏水内腔以及较高的水溶性,可以用于包埋保护一些化学稳定性差的物质,在食品、生物、化学、医药等领域前景可观。本研究分别将超嗜
N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,GlcNAc)是氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)的衍生物,在保健食品和医药领域具有广泛应用。目前,GlcNAc的主要生产方法有酸水解法、酶水解法、化学合成法以及微生物发酵法。本论文采用微生物发酵法来合成GlcNAc,以一株可合成GlcNAc的重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为出发菌株,优化GlcNAc代
本研究的目的是寻找精氨酸代谢途径中与酸胁迫相关的关键作用因素。通过构建重组菌株Lactococcus lactis NZ9000(p NZ8148-argG)与Lactococcus lactis NZ9000(pNZ8148-argH)使ArgG和ArgH蛋白在Lactococcus lactis NZ9000中成功表达。与对照菌株相比,重组菌株在多种环境胁迫下表现出较高的生长性能、存活率以及发