【摘 要】
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第一部分NR3A亚基在抑郁、焦虑样行为中的作用探讨目的:研究抑郁模型小鼠NMDA受体3A亚基（NR3A）的变化及敲除NR3A后对小鼠抑郁焦虑样行为的影响,以探讨NR3A在抑郁、焦虑中发挥的可能作用。方法:选取7至8周龄C57BL/6N小鼠37只,随机分为对照组（n=17）和CRS模型组（n=20）,模型组进行为期2周的慢性束缚刺激,对照组不做任何干预,刺激结束后测量2组小鼠体重,用强迫游泳实验和糖
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第一部分NR3A亚基在抑郁、焦虑样行为中的作用探讨目的:研究抑郁模型小鼠NMDA受体3A亚基（NR3A）的变化及敲除NR3A后对小鼠抑郁焦虑样行为的影响,以探讨NR3A在抑郁、焦虑中发挥的可能作用。方法:选取7至8周龄C57BL/6N小鼠37只,随机分为对照组（n=17）和CRS模型组（n=20）,模型组进行为期2周的慢性束缚刺激,对照组不做任何干预,刺激结束后测量2组小鼠体重,用强迫游泳实验和糖水偏好实验确认小鼠CRS抑郁模型建模成功,随后断颈处死小鼠,在冰上迅速剖出小鼠大脑,分离海马组织,提取RNA和蛋白检测NR3A的表达情况。使用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6N小鼠ES细胞NR3A基因的第二个外显子后,将这些ES细胞注射到C57BL/6小鼠的囊胚中,产生的嵌合雄性小鼠与雌性小鼠杂交产生F1杂合敲除型小鼠;将F1杂合敲除型小鼠分别与野生型C57BL/6N小鼠杂交,得到更多的杂合敲除型小鼠;当杂合敲除型小鼠足够时进行互交,生成纯合敲除型小鼠和野生型小鼠,对上述小鼠的抑郁、焦虑样行为进行检测。行为学实验均选用7-8周龄小鼠,纳入雄性纯合敲除型小鼠16只,雄性杂合敲除型小鼠14只,同窝出生雄性野生型小鼠17只。纳入雌性纯合敲除型小鼠16只和同窝出生雌性野生型小鼠13只。抑郁相关行为使用糖水偏好,强迫游泳和悬尾实验检测,焦虑相关行为使用高架0迷宫实验,旷场实验检测。结果:经过2周束缚后,CRS模型组体重降低（p＜0.001）,糖水偏好降低（p＜0.001）,强迫游泳不动时间增加（p＜0.001）,表明CRS建模成功。与对照组小鼠相比,CRS模型组小鼠海马脑区NR3A m RNA和蛋白表达下降（p＜0.05;p＜0.05）。使用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6N小鼠NR3A亚基后,雄性NR3A敲除小鼠糖水偏好减低（p＜0.05）,糖水饮用量减少（p＜0.001）,悬尾实验不动时间延长（p＜0.01）,旷场实验中粪便数增加（p＜0.01）,高架0迷宫实验在闭合臂停留时间增加（p＜0.01）,表明敲除NR3A后雄性小鼠出现抑郁及焦虑样行为。雌性NR3A敲除小鼠糖水饮用量减少（p＜0.01）,强迫游泳实验不动时间增加（p＜0.01）,表明敲除NR3A后雌性小鼠出现抑郁样行为。结论:NR3A亚基下调可能在小鼠抑郁及焦虑的发病中发挥重要作用。第二部分NR3A亚基可能通过调控突触可塑性影响小鼠抑郁、焦虑样行为目的:研究敲除NR3A亚基对小鼠海马树突棘和突触可塑性的影响,以探讨NR3A亚基参与抑郁症的可能机制。方法:选取8-10周雄性小鼠每组8只,断颈处死小鼠,在冰上迅速剖出大脑分离海马组织,提取RNA和蛋白检测PSD95的表达情况;每组随机选择雄性小鼠5只,断颈处死后迅速剖出大脑,双蒸水冲去表面血液,进行高尔基染色后切成100um脑片,在油镜下计数树突棘数量;每组随机选择雄性小鼠5只,用戊二醛对小鼠进行灌注固定,将海马组织制成超薄切片,在50000倍数视野下观察小鼠海马突触超微结构,并对突触个数和PSD面积进行分析。结果:高尔基染色发现敲除NR3A后小鼠海马DG区（p＜0.05）和CA1区（p＜0.001）树突棘减少,CA2/3区没有差异;透射电镜结果显示NR3A敲除后小鼠突触数量（p＜0.01）和PSD面积（p＜0.001）减少;q-PCR（p＜0.05）和WB（p＜0.01）结果显示敲除NR3A后小鼠PSD95表达下降。结论:敲除NR3A亚基后小鼠海马树突棘减少,突触可塑性受损。
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