论文部分内容阅读
本课题以甘肃中部干旱生境土壤为分离材料，采用透明圈法从中分离筛选对食源性致病细菌具有抑制作用的拮抗菌。通过形态学、生理生化及16S rDNA分子生物学方法鉴定拮抗菌种属；运用大孔吸附树脂对获得的拮抗菌株的抑菌活性成分进行分离，分离的活性组分经190-1100nm全波长扫描，以确定其最大吸收峰；再采用HPLC法对分离的活性组分进一步纯化，然后通过电喷雾电离质谱法测定其分子量、核磁共振法测定该化合物的C谱和H谱，确定其结构。最后对纯化后的活性物质进行了拮抗金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）的抑菌试验和部分理化性质的测定。本研究取得的主要结果如下：1.从甘肃中部干旱生境土壤中分离得到了一株对食源性致病菌金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）具有抑制作用的拮抗菌A-2，且A-2发酵液对金黄色葡萄球菌抑菌最低浓度稀释梯度为10-6，鉴定为产碱杆菌（Alcaligenes sp.），命名为Alcaligenes sp.A-2。2. Alcaligenes sp.A-2还对大肠杆菌（Escherichia coli），枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），植物乳酸杆菌（Lactobacillus plantarum）和表皮葡萄球菌（Stapyloccocushepidermidis）具有抑制作用。3.经过优选试验确定出了最佳树脂为X-5，洗脱液为95%乙醇水溶液，获得了一个对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用活性组分。经190-1100nm全波长扫描证实该活性组分在214nm处有最大吸收峰。该活性组分经HPLC纯化得到了3种单峰化合物，经拮抗金黄色葡萄球菌试验证明，其中一种单峰化合物具有抑菌活性。4.质谱仪上测出该化合物信号APCI（+）245.4[M+H+]，可知化合物的分子量为244.4。该化合物经核磁共振仪检测其H谱和C谱，分析确定该化合物的结构为环D-脯氨酸D-苯丙氨酸（Cyclo-(D)-Pro-(D)-Phe）。5.对该化合物进行部分理化性质的测定，结果表明该化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及表皮葡萄球菌的最近抑菌浓度为0.1μg/mL，且其对热、酸、碱、紫外线及光照均具有良好的稳定性。