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目的:观察黄芪甲苷对肝细胞L-02的辐射防护作用,并对其相关机制进行研究,为开发新辐射防护药物提供实验依据。方法:实验分为对照组、黄芪甲苷组、辐照组、黄芪甲苷+辐照组。采用MTT法检测黄芪甲苷对肝细胞L-02在不同时间的毒性作用,选出合适的黄芪甲苷浓度;给予0、0.5、1、2、4、6、8 Gy的137Cs-γ射线照射后24、48、72 h采用MTT法检测电离辐射对细胞存活率的影响,选出合适的辐照剂量;通过MTT法检测黄芪甲苷对辐照后细胞存活率的影响;克隆形成实验观察黄芪甲苷对辐照后L-02细胞克隆形成的影响;生长曲线法观察黄芪甲苷对L-02细胞的增殖能力的影响;DCFH-DA法检测活性氧(ROS)含量;微板法检测丙二醛(MDA)含量及还原型谷胱甘肽(GSH)活力;WST-1法检测总超氧化物歧化酶(SOD)活力;流式细胞术检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞凋亡率及细胞周期的影响;罗丹明123荧光探针检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞线粒体膜电位的改变的影响;免疫荧光共聚焦显微镜观察γH2AX焦点数;Western Blot检测各组Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达。结果:1.MTT结果显示不同浓度的黄芪甲苷作用L-02细胞不同时间后,细胞存活率无显著差异;辐照后细胞存活率随受照剂量增大而降低,随辐照后时间增长而降低。黄芪甲苷能够恢复辐射损伤后L-02细胞的增殖能力,抑制辐射所致的胞内ROS和MDA含量升高,同时使胞内SOD和GSH活力有所恢复。2.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示辐照后细胞凋亡率随着药物浓度的增加而降低;细胞周期结果显示黄芪甲苷能有效的缓解电离辐射引起的细胞G2期阻滞;罗丹明123染色结果显示,黄芪甲苷+辐照组细胞线粒体膜电位均高于辐照组。3.激光共聚焦显微镜结果显示黄芪甲苷+辐照组γH2AX焦点数明显少于辐照组。4.Western Blot结果显示:辐照组细胞内Nrf2、HO-1及NQO1表达升高,黄芪甲苷+辐照组Nrf2、HO-1及NQO1表达则是随着药物浓度增加而降低。结论:1.电离辐射诱导L-02细胞DNA损伤、G2期阻滞,细胞存活率降低。2.终浓度为20-80μg/mL的黄芪甲苷对L-02细胞没有明显的细胞毒性,并且具有较好的辐射防护效果。3.黄芪甲苷可能是通过清除辐照后L-02细胞内升高的自由基、增高细胞线粒体膜电位、恢复抗氧化酶活力、减少G2/M期阻滞比例降低γ射线诱发的氧化损伤发挥辐射防护作用。4.黄芪甲苷可通过Nrf2途径来减轻电离辐射所致的损伤。