【摘 要】
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研究目的脑卒中是全球范围内导致死亡的第二大原因,同时也是导致残疾的主要原因之一。目前有研究表明半胱氨酸依赖性天冬氨酸特异性蛋白酶-12（Caspase-12）参与了脑缺血再灌注损伤,但是其作用机制尚不明确。研究方法本实验使用糖氧剥夺模型在体外建立原代小鼠星形胶质细胞缺氧复氧损伤模型,应用LDH检测试剂盒及Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞损伤及凋亡情况。同时使用蛋白免疫印迹法与免疫荧光检测
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研究目的脑卒中是全球范围内导致死亡的第二大原因,同时也是导致残疾的主要原因之一。目前有研究表明半胱氨酸依赖性天冬氨酸特异性蛋白酶-12（Caspase-12）参与了脑缺血再灌注损伤,但是其作用机制尚不明确。研究方法本实验使用糖氧剥夺模型在体外建立原代小鼠星形胶质细胞缺氧复氧损伤模型,应用LDH检测试剂盒及Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞损伤及凋亡情况。同时使用蛋白免疫印迹法与免疫荧光检测Caspase-12、半胱氨酸依赖性天冬氨酸特异性蛋白酶-3裂解片段（Cleaved Caspase-3）、NLRP3炎症小体、白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）表达水平。使用Caspase-12特异性抑制剂（Z-ATAD-FMK,ZAF）预处理星形胶质细胞后,再进行缺氧复氧造模,测定细胞损伤情况与蛋白质表达水平变化。研究结果使用糖氧剥夺模型缺氧3-4小时后,星形胶质细胞细胞损伤与凋亡水平明显上升,且Caspase-12、Cleaved Caspase-3、NLRP3炎症小体、IL-1β表达水平明显增高。使用ZAF抑制Caspase-12后,星形胶质细胞缺氧复氧后细胞损伤及凋亡明显缓解,并且NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3、IL-1β的表达较未使用药物干预相比明显降低。研究结论Caspase-12参与了糖氧剥夺导致的星形胶质细胞损伤,并且其机制可能与调节NLRP3炎症小体的激活相关。
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