中华大蟾蜍（Bufo Gargarizans）属于脊索动物门（Chordata）、脊椎动物亚门（Vertebrata）、两栖纲（Amphibia）、无尾目（Anura）、蟾蜍科（Bufonidae）、蟾蜍属（Bufo）动物,是珍贵的药用动物。生物活性肽因为其具有对生命机体功能发挥着重要的作用,因而在世界范围内成为探索的热点之一。本研究是以中华大蟾蜍为研究对象,主要对蟾蜍皮应用酶解法制备活性肽并进行抗氧化和抗菌方面的药理研究。本论文研究内容主要如下:1、蟾蜍皮酶解条件优化及理化性质研究:对中华大蟾蜍使用酶解法提取活性肽,优化酶解条件,并对通过酶解法提取到的活性肽进行理化性质的研究。试验结果表明酶解法能够从蟾皮中获得活性肽,酶解产物命名为W₁。通过比较碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶与中性蛋白酶五种蛋白酶对蟾蜍皮的水解度确定最佳水解酶是中性蛋白酶。使用中性蛋白酶进行时间、底物浓度和E/S单因素和正交试验,得出最佳酶解工艺条件为水解时间4h,底物浓度6%,E/S为15%。粗提物W₁经Tricine-SDS-PAGE测定,结果显示蟾蜍皮肤活性肽粗提物分子量集中在10KDa以下。2、蟾蜍皮酶解肽分离及抗氧化性研究:试验采用Sephadex—G50凝胶过滤色谱法对蟾蜍皮活性肽粗提物W₁进行分离纯化,对分离得到的组分进行抗氧化试验以及氨基酸成分研究。分离结果得到F₁、F₂两种组分。比较两种组分对DPPH·、ABTS⁺·、·OH的清除作用和还原力强弱。经比较发现各种方法测定的抗氧化结果F₂均高于F₁,其中F₁、F₂对DPPH·最大清除率都接近100%,IC50分别为2.24mg/mL与1.004mg/mL;F₁、F₂对ABTS⁺·最大清除率也都接近100%,IC50分别为1.94mg/mL与1.13mg/mL;F₁、F₂对·OH最大清除率都达到了80%以上,IC50分别为0.73mg/mL与0.63mg/mL;其还原力测定结果证实了F₁与F₂都有很强的抗氧化性,并且F₂的还原力高于F₁。氨基酸分析结果表明F₁和F₂各有17种氨基酸,其中F₁和F₂含有的疏水性氨基酸有丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸以及异亮氨酸;F₂中含有的疏水性氨基酸浓度均高于F₁中对应的氨基酸;从必需氨基酸角度看,F₁与F₂中含有亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸和异亮氨酸,并且除了蛋氨酸外,其他几种必需氨基酸浓度F₂均明显高于F₁对应的必需氨基酸。3、蟾蜍皮酶解肽抗菌性研究:试验采用金黄色葡萄球菌与大肠杆菌分别作为革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的代表菌种,以卡那霉素作为阳性对照,无菌水作为阴性对照,测定F₁、F₂两种组分的抑菌性研究。结果表明F₂对金黄色葡萄球菌抑制效果较强,对大肠杆菌抑菌作用相对较弱,而F₁对金黄色葡萄球菌的抑菌作用远不及F₂,对大肠杆菌并未发现抑制作用;对F₂进行两种菌的最低抑菌浓度测定,结果发现F₂对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为15.63μg/mL,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为250μg/mL,相对较高。