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目的:翼状胬肉(pterygium)是一种常见的眼表疾病,表现为呈三角形增厚的球结膜组织病变。其头部侵袭生长入角膜,体部位于睑裂区的一侧。组织病理学改变主要表现:高度纤维血管化及富含弹性纤维变性的结缔组织、角膜上皮基底膜的破坏,纤维组织侵入Bowman层及角膜基质浅层。生物学上表现为具有一些肿瘤样特性:轻度发育不良、局部浸润性和高复发率等。
Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate1, Racl)通过调节肌动蛋白细胞骨架,促进细胞运动。当Racl被激活后,可参与肌动蛋白应力纤维和粘附斑形成,促进细胞骨架结构重组,调节片状伪足与丝状伪足伸延,影响细胞的形体极化,增强细胞运动迁移。基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2, MMP-2)是MMps家族成员之一,对细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)有广泛的降解作用,是调节ECM动态平衡的最重要的酶系之一。MMP-2在翼状胬肉中参与ECM的破坏及新生血管的形成而备受关注。Ki-67是一种存在于增殖细胞核基质内的抗原,Ki-67增殖指数可以敏感地反映出细胞的增殖活性。翼状胬肉组织存在异常的增殖调控,使得胬肉的上皮及间质细胞和正常结膜处于不同的细胞分裂周期。
本研究首次采用免疫组化法检测Racl在翼状胬肉中的表达,同时检测MMP-2和Ki-67的表达,并分析这三者在翼状胬肉表达的相关性,试图探讨利用Racl、MMP-2及Ki-67作为标记物评估翼状胬肉生物学特性,为临床诊疗提供参考。
方法:
39例原发性翼状胬肉组织标本取自2009年3月~2009年7月在河北省眼病治疗中心行翼状胬肉切除术的患者。其中男性21例,女性18例;平均年龄60.5岁;静止期12例,进展期27例。对照组取正常球结膜12例,其中男性7例,女性5例;平均年龄41.2岁。所有病例术前均排除其他角膜及结膜疾病。所有标本术后立即用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片后分别进行HE染色和Racl、MMP-2及Ki-67免疫组化染色。
免疫阳性反应物呈黄色、棕黄色或棕褐色颗粒状。表达类型:Racl和MMP-2表达为细胞浆型;Ki-67表达为细胞核型;每种染色每例均随机观察10个高倍视野(×400),根据镜下棕色反应强度及阳性细胞数,用半定量积分法判定结果。
统计学处理:所有数据用SPSS15.0统计软件包进行分析处理。等级相关资料采用秩和检验,两两指标间相关性采用Spearman等级相关分析。以a=0.05为检验水准,P<0.05为差异有显著性。
结果:
1翼状胬肉中Racl表达:
正常球结膜组织中未见Racl阳性表达,39例翼状胬肉组织中的阳性表达率为59%,Racl在翼状胬肉中的阳性表达明显高于正常球结膜组织(P<0.05)。静止期Racl阳性表达率为58.3%(7/12),进展期阳性表达率为59.2%(16/27),静止期和进展期翼状胬肉的Racl阳性表达率比较无显著性差异(尸>0.05)。不同性别和不同年龄组Racl阳性表达亦无显著性差异(P>0.05)。
2翼状胬肉中MMP-2表达:
正常球结膜组织中未见MMP-2阳性表达,39例翼状胬肉组织中的阳性表达率为51.2%,翼状胬肉MMP-2的阳性表达明显高于正常球结膜组织(P<0.05)。静止期MMP-2阳性表达率为50%(6/12),进展期阳性表达率为51.8%(14/27),静止期和进展期MMP-2阳性表达率比较无显著性差异(P>0.05)。不同性别和不同年龄组MMP-2阳性表达亦无显著性差异(P>0.05)。
3翼状胬肉中Ki-67表达:
正常球结膜组织中Ki-67仅在少量基底细胞表达,阳性表达率为25%(3/12)。39例翼状胬肉组织阳性表达率为64.1%(25/39),Ki-67在翼状胬肉中的阳性表达与正常球结膜组织中的表达差异有显著性(尸<0.05)。Ki-67在12例静止期翼状胬肉中阳性表达率为33.3%(4/12),在27例进展期翼状胬肉中阳性表达率为77.8%(21/27),静止期和进展期翼状胬肉的Ki-67阳性表达率比较,统计学有显著性差异(尸<0.05)。不同性别之间的表达差异不明显,男女阳性率分别为61.9%(13/21)和66.7%(12/18),差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄组的表达无差异(P>0.05)。
4翼状胬肉中Racl、MMP-2和Ki-67表达的相关分析
Racl表达与MMP-2表达呈正相关(r=0.571,P<0.05)。Racl表达与Ki-67表达、MMP-2表达与Ki-67表达均无相关性(r=0.384,r=0.037,P>0.05)。
结论:
1首次发现翼状胬肉上皮组织表达Racl。Racl的高表达可能在翼状胬肉的形成和发生发展过程中起一定作用。
2 Racl、MMP-2及Ki-67在翼状胬肉中的表达明显高于正常球结膜,提示翼状胬肉在细胞骨架,基底膜分解代谢和细胞增殖活跃方面发生了变化。
3 Racl、MMP-2表达密切相关,说明两者在翼状胬肉的发生发展中起协同作用。Racl可能引起MMP-2活化和表达增强。
4应用免疫组化法联合检测Racl与MMP-2的表达可作为标记物评估翼状胬肉的侵袭潜能,并为临床治疗提供病理学依据。